东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
5期
66-71
,共6页
郭庆勋%阮文渊%怀凤涛%郝宏智
郭慶勛%阮文淵%懷鳳濤%郝宏智
곽경훈%원문연%부봉도%학굉지
辣椒素%苯丙氨酸解氨酶(PAL)%原核表达
辣椒素%苯丙氨痠解氨酶(PAL)%原覈錶達
랄초소%분병안산해안매(PAL)%원핵표체
以辣椒品种"益都红"胎座RNA反转录的cDNA为模板,根据pnl基因保守序列设计引物,PCR扩增得到1条全长2 157 bp的目的片段.该基因包含有完整的开放阅读框架,编码718个氨基酸,预测的分子质量为73 ku.与多种植物PAL的氨基酸序列有一定的同源性,其中与同科同属植物朝天椒的同源性最高.应用分子克隆的方法成功地构建了pET-32a-pal重组表达质粒,优化得到诱导表达的最佳条件为:IPTG 0.3 mmol·L-1,温度28℃,时间6 h,经SDS-PAGE检测6xHis-PAL在E.coli中得到了高效表达,重组蛋白分子质量约为93 ku.因此,该基因的克隆与原核表达为深入研究辣椒PAL的基因结构、生物活性、表达调控机制以及辣椒素的生物合成机制奠定了重要基础.
以辣椒品種"益都紅"胎座RNA反轉錄的cDNA為模闆,根據pnl基因保守序列設計引物,PCR擴增得到1條全長2 157 bp的目的片段.該基因包含有完整的開放閱讀框架,編碼718箇氨基痠,預測的分子質量為73 ku.與多種植物PAL的氨基痠序列有一定的同源性,其中與同科同屬植物朝天椒的同源性最高.應用分子剋隆的方法成功地構建瞭pET-32a-pal重組錶達質粒,優化得到誘導錶達的最佳條件為:IPTG 0.3 mmol·L-1,溫度28℃,時間6 h,經SDS-PAGE檢測6xHis-PAL在E.coli中得到瞭高效錶達,重組蛋白分子質量約為93 ku.因此,該基因的剋隆與原覈錶達為深入研究辣椒PAL的基因結構、生物活性、錶達調控機製以及辣椒素的生物閤成機製奠定瞭重要基礎.
이랄초품충"익도홍"태좌RNA반전록적cDNA위모판,근거pnl기인보수서렬설계인물,PCR확증득도1조전장2 157 bp적목적편단.해기인포함유완정적개방열독광가,편마718개안기산,예측적분자질량위73 ku.여다충식물PAL적안기산서렬유일정적동원성,기중여동과동속식물조천초적동원성최고.응용분자극륭적방법성공지구건료pET-32a-pal중조표체질립,우화득도유도표체적최가조건위:IPTG 0.3 mmol·L-1,온도28℃,시간6 h,경SDS-PAGE검측6xHis-PAL재E.coli중득도료고효표체,중조단백분자질량약위93 ku.인차,해기인적극륭여원핵표체위심입연구랄초PAL적기인결구、생물활성、표체조공궤제이급랄초소적생물합성궤제전정료중요기출.
