CAJ | 학술논문

本研究主要探讨经基因修饰和筛选后转基因供体细胞的挑选及处理对牛转入溶菌酶基因克隆胚胎早期发育的影响.用含人溶菌酶基因(human lysozyme,hLYZ)乳腺特异表达载体pEBH重组质粒转染高产荷斯坦牛成纤维细胞,经G418筛选后的转基因阳性细胞作为核供体细胞成功构建了转hLYZ基因克隆胚胎.结果发现,基因转染及筛选过程对转基因重构胚的发育有不利的影响,囊胚发育率显著降低;以注核针内径为参照,挑选直径为15～20μm的转基因阳性细胞作为供体细胞,重构胚的融合率和囊胚率较其它组差异显著(分别为80.4%和33.8%,P<0.05);生长旺盛期的细胞构建的转基因克隆胚的卵裂率及囊胚发育率显著高于经血清饥饿和生长接触抑制处理组(P＜0.05);所有的转基因克隆胚在体外发育的各个发育时期都能观察到绿色荧光蛋白的表达,但表达的强弱在不同个体及相同个体不同发育时期之间存在差异.随机挑选10枚囊胚以PCR法进行鉴定,结果全部为阳性转基因胚胎.研究结果表明,利用体细胞核移植方法可以获得转舰hLYZ基因的克隆胚胎,重构胚可成功的发育到囊胚阶段;挑选生长旺盛期的直径为15～20 μm的转基因阳性细胞作为供体细胞可显著提高转基因克隆胚的融合率和囊胚率.
본연구주요탐토경기인수식화사선후전기인공체세포적도선급처리대우전입용균매기인극륭배태조기발육적영향.용함인용균매기인(human lysozyme,hLYZ)유선특이표체재체pEBH중조질립전염고산하사탄우성섬유세포,경G418사선후적전기인양성세포작위핵공체세포성공구건료전hLYZ기인극륭배태.결과발현,기인전염급사선과정대전기인중구배적발육유불리적영향,낭배발육솔현저강저;이주핵침내경위삼조,도선직경위15～20μm적전기인양성세포작위공체세포,중구배적융합솔화낭배솔교기타조차이현저(분별위80.4%화33.8%,P<0.05);생장왕성기적세포구건적전기인극륭배적란렬솔급낭배발육솔현저고우경혈청기아화생장접촉억제처리조(P＜0.05);소유적전기인극륭배재체외발육적각개발육시기도능관찰도록색형광단백적표체,단표체적강약재불동개체급상동개체불동발육시기지간존재차이.수궤도선10매낭배이PCR법진행감정,결과전부위양성전기인배태.연구결과표명,이용체세포핵이식방법가이획득전함hLYZ기인적극륭배태,중구배가성공적발육도낭배계단;도선생장왕성기적직경위15～20 μm적전기인양성세포작위공체세포가현저제고전기인극륭배적융합솔화낭배솔.