生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
1期
25-29
,共5页
苹果锈果类病毒%锤头型核酶%转录%体外切割活性
蘋果鏽果類病毒%錘頭型覈酶%轉錄%體外切割活性
평과수과류병독%추두형핵매%전록%체외절할활성
根据锤头型核酶的作用模式,设计、合成和克隆了特异切割苹果锈果类病毒ASSVd正链(194-196位点)或负链(89-91位点)RNA的2个短臂锤头型核酶基因:42nt的Rz ASSVd(+)和40nt的Rz ASSVd(-).经转录获得核酶转录物和32P标记的ASSVd正、负链转录物.将核酶与ASSVd混合,50℃或37℃保温3～4h,进行8%PAGE(含8mol/L尿素)和放射自显影分析.体外切割检测表明:2个核酶均具有特异切割活性,其中RzASSVd(-)对ASSVd负链的切割活性较高,对ASSVd正链不起作用.RzASSVd(+)对ASSVd正链的切割活性较弱,对ASSVd负链亦不起作用.在此基础上,构建得到双价核酶基因pGEMRzASSVd(±).
根據錘頭型覈酶的作用模式,設計、閤成和剋隆瞭特異切割蘋果鏽果類病毒ASSVd正鏈(194-196位點)或負鏈(89-91位點)RNA的2箇短臂錘頭型覈酶基因:42nt的Rz ASSVd(+)和40nt的Rz ASSVd(-).經轉錄穫得覈酶轉錄物和32P標記的ASSVd正、負鏈轉錄物.將覈酶與ASSVd混閤,50℃或37℃保溫3～4h,進行8%PAGE(含8mol/L尿素)和放射自顯影分析.體外切割檢測錶明:2箇覈酶均具有特異切割活性,其中RzASSVd(-)對ASSVd負鏈的切割活性較高,對ASSVd正鏈不起作用.RzASSVd(+)對ASSVd正鏈的切割活性較弱,對ASSVd負鏈亦不起作用.在此基礎上,構建得到雙價覈酶基因pGEMRzASSVd(±).
근거추두형핵매적작용모식,설계、합성화극륭료특이절할평과수과류병독ASSVd정련(194-196위점)혹부련(89-91위점)RNA적2개단비추두형핵매기인:42nt적Rz ASSVd(+)화40nt적Rz ASSVd(-).경전록획득핵매전록물화32P표기적ASSVd정、부련전록물.장핵매여ASSVd혼합,50℃혹37℃보온3～4h,진행8%PAGE(함8mol/L뇨소)화방사자현영분석.체외절할검측표명:2개핵매균구유특이절할활성,기중RzASSVd(-)대ASSVd부련적절할활성교고,대ASSVd정련불기작용.RzASSVd(+)대ASSVd정련적절할활성교약,대ASSVd부련역불기작용.재차기출상,구건득도쌍개핵매기인pGEMRzASSVd(±).
