江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2004年
6期
479-481,484
,共4页
孙宏彬%赵缜%卫玲%王升年%季育华
孫宏彬%趙縝%衛玲%王升年%季育華
손굉빈%조진%위령%왕승년%계육화
人巨细胞病毒%pp65%表达纯化%蛋白质印迹法%ELISA
人巨細胞病毒%pp65%錶達純化%蛋白質印跡法%ELISA
인거세포병독%pp65%표체순화%단백질인적법%ELISA
目的:应用生物工程方法研制人巨细胞病毒包膜蛋白pp65,并行相应抗体制备的探讨性研究.方法:利用DNA重组技术,以HCMV AD169病毒株基因组为模板,通过PCR克隆HCMV pp65基因.以pET32a(+)为表达载体,构建重组质粒,并在E.Coli (DE3-plys)中诱导表达.然后经柱层析获得纯化蛋白,由蛋白质印迹法验证蛋白的特异性.最后,免疫小鼠获取抗血清,检测抗体产生的效价.结果:重组质粒经测序与Genebank序列一致,转染的细菌能高效表达目的蛋白,纯化后的蛋白能与已知单克隆抗体结合,免疫后的小鼠抗血清能同时识别重组蛋白和病毒抗原.结论:重组表达的HCMV pp65全蛋白经纯化获得较高纯度,且保留良好的免疫原特性.为HCMV感染诊断用单克隆抗体的研制奠定了基础,并为HCMV感染的免疫诊断和治疗提供了新的研究方向.
目的:應用生物工程方法研製人巨細胞病毒包膜蛋白pp65,併行相應抗體製備的探討性研究.方法:利用DNA重組技術,以HCMV AD169病毒株基因組為模闆,通過PCR剋隆HCMV pp65基因.以pET32a(+)為錶達載體,構建重組質粒,併在E.Coli (DE3-plys)中誘導錶達.然後經柱層析穫得純化蛋白,由蛋白質印跡法驗證蛋白的特異性.最後,免疫小鼠穫取抗血清,檢測抗體產生的效價.結果:重組質粒經測序與Genebank序列一緻,轉染的細菌能高效錶達目的蛋白,純化後的蛋白能與已知單剋隆抗體結閤,免疫後的小鼠抗血清能同時識彆重組蛋白和病毒抗原.結論:重組錶達的HCMV pp65全蛋白經純化穫得較高純度,且保留良好的免疫原特性.為HCMV感染診斷用單剋隆抗體的研製奠定瞭基礎,併為HCMV感染的免疫診斷和治療提供瞭新的研究方嚮.
목적:응용생물공정방법연제인거세포병독포막단백pp65,병행상응항체제비적탐토성연구.방법:이용DNA중조기술,이HCMV AD169병독주기인조위모판,통과PCR극륭HCMV pp65기인.이pET32a(+)위표체재체,구건중조질립,병재E.Coli (DE3-plys)중유도표체.연후경주층석획득순화단백,유단백질인적법험증단백적특이성.최후,면역소서획취항혈청,검측항체산생적효개.결과:중조질립경측서여Genebank서렬일치,전염적세균능고효표체목적단백,순화후적단백능여이지단극륭항체결합,면역후적소서항혈청능동시식별중조단백화병독항원.결론:중조표체적HCMV pp65전단백경순화획득교고순도,차보류량호적면역원특성.위HCMV감염진단용단극륭항체적연제전정료기출,병위HCMV감염적면역진단화치료제공료신적연구방향.
