CAJ | 학술논문

目的初步探讨钙离子载体(CI)在体外迅速诱导人外周血单核细胞(PBMC)分化为树突状细胞(DC)的信号转导途径.方法分离健康献血者的PBMC,在体外用人重组粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和CI培养40h或rhGM-CSF和TNF-α培养5 d,部分PBMC用环胞菌素A(CsA)预处理30 min后,再加入CI或TNF-α;相差显微镜下观察细胞的形态;流式细胞仪检测细胞表面CD14、CD80、CD86、CD83、HLA-DR等分子的表达;MTT比色法检测其对同种异体T淋巴细胞的刺激增殖作用;凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)检测不同方法培养的细胞其核转录因子-κB(NF-κB)的活化水平.结果健康献血者的PBMC经rhGM-CSF与CI培养40h或rhGM-CSF与TNF-α培养5 d,均可获得DC的典型形态和表面分子的表达,包括CD14表达下调,CD80、CD86及HLA-DR等分子表达的上调,以及较强刺激同种异体T淋巴细胞增殖的作用;其中CI诱导的DC其CD80、CD86、CD83、HLA-DR等分子的上调更明显,刺激T淋巴细胞的增殖能力更强.经TNF-α及CI所诱导分化的DC均具有较好的NF-κB活性.但经CI诱导的DC,其形态、表面标志物、对T淋巴细胞的刺激增殖能力及NF-κB的活性,均受到CsA的抑制;而TNF-α所诱导的DC却不受CsA的影响.结论CI比TNF-α更迅速、更高效地诱导PBMC向DC分化的原因,是信号转导途径的不同,但不论上游信号转导途径有何不同,两者最终都通过激活NF-κB来诱导细胞的分化.
목적초보탐토개리자재체(CI)재체외신속유도인외주혈단핵세포(PBMC)분화위수돌상세포(DC)적신호전도도경.방법분리건강헌혈자적PBMC,재체외용인중조립/거서세포집락자격인자(rhGM-CSF)화CI배양40h혹rhGM-CSF화TNF-α배양5 d,부분PBMC용배포균소A(CsA)예처리30 min후,재가입CI혹TNF-α;상차현미경하관찰세포적형태;류식세포의검측세포표면CD14、CD80、CD86、CD83、HLA-DR등분자적표체;MTT비색법검측기대동충이체T림파세포적자격증식작용;응효전영천이솔변동분석(EMSA)검측불동방법배양적세포기핵전록인자-κB(NF-κB)적활화수평.결과 건강헌혈자적PBMC경rhGM-CSF여CI배양40h혹rhGM-CSF여TNF-α배양5 d,균가획득DC적전형형태화표면분자적표체,포괄CD14표체하조,CD80、CD86급HLA-DR등분자표체적상조,이급교강자격동충이체T림파세포증식적작용;기중CI유도적DC기CD80、CD86、CD83、HLA-DR등분자적상조경명현,자격T림파세포적증식능력경강.경TNF-α급CI소유도분화적DC균구유교호적NF-κB활성.단경CI유도적DC,기형태、표면표지물、대T림파세포적자격증식능력급NF-κB적활성,균수도CsA적억제;이TNF-α소유도적DC각불수CsA적영향.결론CI비TNF-α경신속、경고효지유도PBMC향DC분화적원인,시신호전도도경적불동,단불론상유신호전도도경유하불동,량자최종도통과격활NF-κB래유도세포적분화.