华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2006年
4期
73-77
,共5页
刘颖%黎敏义%刘志%李孝伟%施振旦
劉穎%黎敏義%劉誌%李孝偉%施振旦
류영%려민의%류지%리효위%시진단
鸡催乳素受体基因%胞外域%克隆%表达%纯化
鷄催乳素受體基因%胞外域%剋隆%錶達%純化
계최유소수체기인%포외역%극륭%표체%순화
根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列(GenBank号:D13154)设计并合成1对覆盖编码区58～1 249位核苷酸的引物,以家鸡垂体总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得了特异性片断,将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌E.coli DH5α永久保存.通过设计第2对引物扩增PRLR胞外域cDNA片段,该片段经酶切后克隆到表达载体pRSET A的EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ两酶切位点之间,构建重组质粒pR-PRLR.该质粒在转化感受态细菌E.coli BL21(DE3)后,在IPTG诱导下促使重组菌表达了相对分子质量为53 640左右的重组融合蛋白,表达量在0.1 mmol/L IPTG诱导5 h时达到最高,约占总菌体蛋白的17.6%左右.表达产物可经体积分数为50%的Ni-NTA凝胶纯化,说明重组蛋白中具有正确的His-tag标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列.
根據傢鷄催乳素受體基因胞外域序列(GenBank號:D13154)設計併閤成1對覆蓋編碼區58～1 249位覈苷痠的引物,以傢鷄垂體總RNA為模闆,經反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法穫得瞭特異性片斷,將該片斷剋隆入pMD18-T載體併轉化感受態細菌E.coli DH5α永久保存.通過設計第2對引物擴增PRLR胞外域cDNA片段,該片段經酶切後剋隆到錶達載體pRSET A的EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ兩酶切位點之間,構建重組質粒pR-PRLR.該質粒在轉化感受態細菌E.coli BL21(DE3)後,在IPTG誘導下促使重組菌錶達瞭相對分子質量為53 640左右的重組融閤蛋白,錶達量在0.1 mmol/L IPTG誘導5 h時達到最高,約佔總菌體蛋白的17.6%左右.錶達產物可經體積分數為50%的Ni-NTA凝膠純化,說明重組蛋白中具有正確的His-tag標籤及之後的鷄催乳素受體編碼區胞外域序列.
근거가계최유소수체기인포외역서렬(GenBank호:D13154)설계병합성1대복개편마구58～1 249위핵감산적인물,이가계수체총RNA위모판,경반전록-취합매련반응(RT-PCR)방법획득료특이성편단,장해편단극륭입pMD18-T재체병전화감수태세균E.coli DH5α영구보존.통과설계제2대인물확증PRLR포외역cDNA편단,해편단경매절후극륭도표체재체pRSET A적EcoR Ⅰ화Hind Ⅲ량매절위점지간,구건중조질립pR-PRLR.해질립재전화감수태세균E.coli BL21(DE3)후,재IPTG유도하촉사중조균표체료상대분자질량위53 640좌우적중조융합단백,표체량재0.1 mmol/L IPTG유도5 h시체도최고,약점총균체단백적17.6%좌우.표체산물가경체적분수위50%적Ni-NTA응효순화,설명중조단백중구유정학적His-tag표첨급지후적계최유소수체편마구포외역서렬.
