CAJ | 학술논문

目的:体外诱导大鼠脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化,并对分化细胞进行相应鉴定,观察脂肪间充质干细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性.方法:实验于2005-05/2006-05在湘雅医院中心实验室完成.①取大鼠腹股沟脂肪,消化分离脂肪间充质干细胞进行原代培养.②流式细胞仪检测第3代脂肪间充质干细胞表面CD29,CD34,CD44表达.③传3代细胞进行微团培养1 d,换用含体积分数为0.01的新生牛血清、10μg/L的转化生长因子β1、6.25 mg/L的胰岛素、6.25 mg/L的转铁蛋白、1×10-7 mol/L的地塞米松、50 mg/L的维生素C的高糖DMEM诱导液,为特定培养条件.④在诱导后4,7,14 d应用阿尔新兰染色、蕃红O/固绿染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学评价软骨形成情况.⑤反转录-聚合酶链反应在诱导后0和14 d检测脂肪间充质干细胞前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA的表达.结果:①脂肪间充质干细胞的形态特征:原代脂肪间充质干细胞呈短梭形、梭形及多角形,3代后呈均一长梭形.②脂肪间充质干细胞的表面标志鉴定:脂肪间充质干细胞表达CD29,CD44,基本不表达CD34.③脂肪间充质干细胞诱导后的形态特征:脂肪间充质干细胞经诱导后,由长梭形转变为三角形、多角形或短梭形,逐渐聚集成结节.④脂肪间充质干细胞诱导后的细胞化学染色结果;诱导后脂肪间充质干细胞胞外基质阿尔新兰染色、蕃红O/固绿染色、和Ⅱ型胶原免疫细胞化学着色阳性.⑤反转录-聚合酶链反应检测结果:反转录-聚合酶链反应检测未诱导脂肪间充质干细胞不表达前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA基因,而诱导后的脂肪间充质干细胞表达前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA基因.结论:脂肪间充质干细胞在由转化生长因子1、胰岛素、转铁蛋白等组成的特定培养基条件诱导下可以定向软骨细胞分化.
목적:체외유도대서지방간충질간세포향연골세포분화,병대분화세포진행상응감정,관찰지방간충질간세포작위연골조직공정충자세포적가행성.방법:실험우2005-05/2006-05재상아의원중심실험실완성.①취대서복고구지방,소화분리지방간충질간세포진행원대배양.②류식세포의검측제3대지방간충질간세포표면CD29,CD34,CD44표체.③전3대세포진행미단배양1 d,환용함체적분수위0.01적신생우혈청、10μg/L적전화생장인자β1、6.25 mg/L적이도소、6.25 mg/L적전철단백、1×10-7 mol/L적지새미송、50 mg/L적유생소C적고당DMEM유도액,위특정배양조건.④재유도후4,7,14 d응용아이신란염색、번홍O/고록염색화Ⅱ형효원면역세포화학평개연골형성정황.⑤반전록-취합매련반응재유도후0화14 d검측지방간충질간세포전Ⅱ형효원단백화취집단백취당mRNA적표체.결과:①지방간충질간세포적형태특정:원대지방간충질간세포정단사형、사형급다각형,3대후정균일장사형.②지방간충질간세포적표면표지감정:지방간충질간세포표체CD29,CD44,기본불표체CD34.③지방간충질간세포유도후적형태특정:지방간충질간세포경유도후,유장사형전변위삼각형、다각형혹단사형,축점취집성결절.④지방간충질간세포유도후적세포화학염색결과;유도후지방간충질간세포포외기질아이신란염색、번홍O/고록염색、화Ⅱ형효원면역세포화학착색양성.⑤반전록-취합매련반응검측결과:반전록-취합매련반응검측미유도지방간충질간세포불표체전Ⅱ형효원단백화취집단백취당mRNA기인,이유도후적지방간충질간세포표체전Ⅱ형효원단백화취집단백취당mRNA기인.결론:지방간충질간세포재유전화생장인자1、이도소、전철단백등조성적특정배양기조건유도하가이정향연골세포분화.