中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2008年
21期
2100-2103
,共4页
孙聪%洪敏%韩业超%王少华%邓志会%刘佳
孫聰%洪敏%韓業超%王少華%鄧誌會%劉佳
손총%홍민%한업초%왕소화%산지회%류가
STAT3%RNA干扰%293细胞%神经胶质瘤细胞
STAT3%RNA榦擾%293細胞%神經膠質瘤細胞
STAT3%RNA간우%293세포%신경효질류세포
目的 观察针对STAT3基因的RNAi腺病毒表达载体对大鼠神经胶质瘤细胞的干扰效果,为探索肿瘤基因治疗的新途径奠定基础.方法设计针对STAT3编码区的短发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,克隆到PGEM-T中,构建重组体,再对重组质粒进行酶切鉴定,DNA测序分析后再克隆到穿梭质粒PDC316中,通过Lipofectamine2000的介导和腺病毒包装质粒PBHG共转染至人胚肾HEK293细胞株中,经同源重组后获得重组腺病毒rAD-STAT3,应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒,以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度.以阴性为对照,转染到大鼠神经胶质瘤(C6)细胞,Western印迹法检测STAT3蛋白质表达量的改变,RT-PCR法观察STAT3基因表达改变.结果酶切鉴定和测序分析均提示STAT3靶向RNAi病毒表达载体构建成功,阳性病毒载体转染后C6细胞STAT3基因表达及蛋白质表达均较阴性转染的对照组显著下降.结论 STAT3靶向RNAi腺病毒表达载体成功构建,并能有效抑制C6细胞中STAT3基因表达.
目的 觀察針對STAT3基因的RNAi腺病毒錶達載體對大鼠神經膠質瘤細胞的榦擾效果,為探索腫瘤基因治療的新途徑奠定基礎.方法設計針對STAT3編碼區的短髮夾結構的兩條DNA序列,經退火成互補雙鏈,剋隆到PGEM-T中,構建重組體,再對重組質粒進行酶切鑒定,DNA測序分析後再剋隆到穿梭質粒PDC316中,通過Lipofectamine2000的介導和腺病毒包裝質粒PBHG共轉染至人胚腎HEK293細胞株中,經同源重組後穫得重組腺病毒rAD-STAT3,應用PCR鑒定重組腺病毒,空斑傳代純化病毒併反複凍融擴增病毒,以50%組織培養感染劑量法(TCID50)測定病毒滴度.以陰性為對照,轉染到大鼠神經膠質瘤(C6)細胞,Western印跡法檢測STAT3蛋白質錶達量的改變,RT-PCR法觀察STAT3基因錶達改變.結果酶切鑒定和測序分析均提示STAT3靶嚮RNAi病毒錶達載體構建成功,暘性病毒載體轉染後C6細胞STAT3基因錶達及蛋白質錶達均較陰性轉染的對照組顯著下降.結論 STAT3靶嚮RNAi腺病毒錶達載體成功構建,併能有效抑製C6細胞中STAT3基因錶達.
목적 관찰침대STAT3기인적RNAi선병독표체재체대대서신경효질류세포적간우효과,위탐색종류기인치료적신도경전정기출.방법설계침대STAT3편마구적단발협결구적량조DNA서렬,경퇴화성호보쌍련,극륭도PGEM-T중,구건중조체,재대중조질립진행매절감정,DNA측서분석후재극륭도천사질립PDC316중,통과Lipofectamine2000적개도화선병독포장질립PBHG공전염지인배신HEK293세포주중,경동원중조후획득중조선병독rAD-STAT3,응용PCR감정중조선병독,공반전대순화병독병반복동융확증병독,이50%조직배양감염제량법(TCID50)측정병독적도.이음성위대조,전염도대서신경효질류(C6)세포,Western인적법검측STAT3단백질표체량적개변,RT-PCR법관찰STAT3기인표체개변.결과매절감정화측서분석균제시STAT3파향RNAi병독표체재체구건성공,양성병독재체전염후C6세포STAT3기인표체급단백질표체균교음성전염적대조조현저하강.결론 STAT3파향RNAi선병독표체재체성공구건,병능유효억제C6세포중STAT3기인표체.
