细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
7期
603-605
,共3页
李青春%梁淑娟%王雪净%刘艳艳%王焕芹%张素华
李青春%樑淑娟%王雪淨%劉豔豔%王煥芹%張素華
리청춘%량숙연%왕설정%류염염%왕환근%장소화
IL-1β%AFP启动子%组织特异性%肝癌
IL-1β%AFP啟動子%組織特異性%肝癌
IL-1β%AFP계동자%조직특이성%간암
目的:构建小鼠甲胎蛋白(AFP)启动子调控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 并检测其在真核细胞内的表达.方法:重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得含小鼠AFP最小启动子及巨细胞病毒(CMV)增强子区(ECMV)的嵌合基因, 将其克隆至pIRES2-EGFP载体, 构建肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.RT-PCR扩增小鼠IL-1β基因, 克隆至pafpIRES2-EGFP, 进行酶谱分析及DNA序列测定.利用jetPEI法将其分别转染H22细胞和YAC-1细胞, 倒置相差荧光显微镜下观察, RT-PCR分析mIL-1β表达水平的变化.结果:SOE-PCR方法获得长度为537 bp的AFP和ECMV嵌合基因, 克隆后经限制性酶切和DNA序列分析确认成功构建了小鼠肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.PCR扩增小鼠IL-1β基因后将其克隆至pafpIRES2-EGFP, 获得AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 细胞转染分析证实, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性高效表达, RT-PCR检测可见转染细胞中mIL-1β水平明显升高.结论:成功构建真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达IL-1β.
目的:構建小鼠甲胎蛋白(AFP)啟動子調控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重組真覈錶達載體pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 併檢測其在真覈細胞內的錶達.方法:重疊延伸PCR技術(SOE-PCR)穫得含小鼠AFP最小啟動子及巨細胞病毒(CMV)增彊子區(ECMV)的嵌閤基因, 將其剋隆至pIRES2-EGFP載體, 構建肝癌細胞特異性錶達載體pafpIRES2-EGFP.RT-PCR擴增小鼠IL-1β基因, 剋隆至pafpIRES2-EGFP, 進行酶譜分析及DNA序列測定.利用jetPEI法將其分彆轉染H22細胞和YAC-1細胞, 倒置相差熒光顯微鏡下觀察, RT-PCR分析mIL-1β錶達水平的變化.結果:SOE-PCR方法穫得長度為537 bp的AFP和ECMV嵌閤基因, 剋隆後經限製性酶切和DNA序列分析確認成功構建瞭小鼠肝癌細胞特異性錶達載體pafpIRES2-EGFP.PCR擴增小鼠IL-1β基因後將其剋隆至pafpIRES2-EGFP, 穫得AFP啟動子調控的小鼠IL-1β重組真覈錶達載體pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 細胞轉染分析證實, 該載體能夠在小鼠肝癌細胞中特異性高效錶達, RT-PCR檢測可見轉染細胞中mIL-1β水平明顯升高.結論:成功構建真覈錶達載體pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 該載體能夠在小鼠肝癌細胞中特異性錶達IL-1β.
목적:구건소서갑태단백(AFP)계동자조공적소서IL-1β(mIL-1β)중조진핵표체재체pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 병검측기재진핵세포내적표체.방법:중첩연신PCR기술(SOE-PCR)획득함소서AFP최소계동자급거세포병독(CMV)증강자구(ECMV)적감합기인, 장기극륭지pIRES2-EGFP재체, 구건간암세포특이성표체재체pafpIRES2-EGFP.RT-PCR확증소서IL-1β기인, 극륭지pafpIRES2-EGFP, 진행매보분석급DNA서렬측정.이용jetPEI법장기분별전염H22세포화YAC-1세포, 도치상차형광현미경하관찰, RT-PCR분석mIL-1β표체수평적변화.결과:SOE-PCR방법획득장도위537 bp적AFP화ECMV감합기인, 극륭후경한제성매절화DNA서렬분석학인성공구건료소서간암세포특이성표체재체pafpIRES2-EGFP.PCR확증소서IL-1β기인후장기극륭지pafpIRES2-EGFP, 획득AFP계동자조공적소서IL-1β중조진핵표체재체pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 세포전염분석증실, 해재체능구재소서간암세포중특이성고효표체, RT-PCR검측가견전염세포중mIL-1β수평명현승고.결론:성공구건진핵표체재체pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 해재체능구재소서간암세포중특이성표체IL-1β.
