人Eppin基因的原核表达及抗原性鉴定
인Eppin기인적원핵표체급항원성감정
Prokaryotic expression and antigenic identification of human eppin gene
  • 万方数据
    中国男科学杂志 중국남과학잡지
    CHINESE JOURNAL OF ANDROLOGY
    2010年 4期 7-10 ,共4页

    孙黎黎%易维京%吴玉章%龙玲%向云龙%胡川闽%梁志清%何畏

    손려려%역유경%오옥장%룡령%향운룡%호천민%량지청%하외

    附睾蛋白酶抑制蛋白%避孕,免疫学%质粒%原核表达 附睪蛋白酶抑製蛋白%避孕,免疫學%質粒%原覈錶達
    부고단백매억제단백%피잉,면역학%질립%원핵표체
    目的 构建人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,eppin)基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以健康人睾丸组织cDNA为模板进行PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a,并转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后证实构建成功;SDS-PAGE结果显示表达产物为相对分子质量36KD的融合蛋白,Western印迹检测纯化后蛋白显示特异性条带.结论 成功构建了pET-32a-Eppin重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Eppin蛋白,为进一步研究其生物学活性及免疫性避孕效应奠定了基础.
    목적 구건인부고단백매억제단백(epididymal protease inhibitor,eppin)기인원핵표체질립,표체병순화중조단백,병탐토기항원성급응용개치.방법 이건강인고환조직cDNA위모판진행PCR확증,장기극륭도원핵표체재체pET-32a,병전화대장애희균BL21(DE3),이병기-β-D류대반유당감(IPTG)진행유도표체,경Ni2+-NTA친화층석주순화,병대순화산물진행Western인적감정.결과 중조질립경쌍매절분석화측서감정후증실구건성공;SDS-PAGE결과현시표체산물위상대분자질량36KD적융합단백,Western인적검측순화후단백현시특이성조대.결론 성공구건료pET-32a-Eppin중조질립,병획득료구유항원특이성적가용성Eppin단백,위진일보연구기생물학활성급면역성피잉효응전정료기출.
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