中国男科学杂志
中國男科學雜誌
중국남과학잡지
CHINESE JOURNAL OF ANDROLOGY
2010年
4期
7-10
,共4页
孙黎黎%易维京%吴玉章%龙玲%向云龙%胡川闽%梁志清%何畏
孫黎黎%易維京%吳玉章%龍玲%嚮雲龍%鬍川閩%樑誌清%何畏
손려려%역유경%오옥장%룡령%향운룡%호천민%량지청%하외
附睾蛋白酶抑制蛋白%避孕,免疫学%质粒%原核表达
附睪蛋白酶抑製蛋白%避孕,免疫學%質粒%原覈錶達
부고단백매억제단백%피잉,면역학%질립%원핵표체
目的 构建人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,eppin)基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以健康人睾丸组织cDNA为模板进行PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a,并转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后证实构建成功;SDS-PAGE结果显示表达产物为相对分子质量36KD的融合蛋白,Western印迹检测纯化后蛋白显示特异性条带.结论 成功构建了pET-32a-Eppin重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Eppin蛋白,为进一步研究其生物学活性及免疫性避孕效应奠定了基础.
目的 構建人附睪蛋白酶抑製蛋白(epididymal protease inhibitor,eppin)基因原覈錶達質粒,錶達併純化重組蛋白,併探討其抗原性及應用價值.方法 以健康人睪汍組織cDNA為模闆進行PCR擴增,將其剋隆到原覈錶達載體pET-32a,併轉化大腸埃希菌BL21(DE3),異丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)進行誘導錶達,經Ni2+-NTA親和層析柱純化,併對純化產物進行Western印跡鑒定.結果 重組質粒經雙酶切分析和測序鑒定後證實構建成功;SDS-PAGE結果顯示錶達產物為相對分子質量36KD的融閤蛋白,Western印跡檢測純化後蛋白顯示特異性條帶.結論 成功構建瞭pET-32a-Eppin重組質粒,併穫得瞭具有抗原特異性的可溶性Eppin蛋白,為進一步研究其生物學活性及免疫性避孕效應奠定瞭基礎.
목적 구건인부고단백매억제단백(epididymal protease inhibitor,eppin)기인원핵표체질립,표체병순화중조단백,병탐토기항원성급응용개치.방법 이건강인고환조직cDNA위모판진행PCR확증,장기극륭도원핵표체재체pET-32a,병전화대장애희균BL21(DE3),이병기-β-D류대반유당감(IPTG)진행유도표체,경Ni2+-NTA친화층석주순화,병대순화산물진행Western인적감정.결과 중조질립경쌍매절분석화측서감정후증실구건성공;SDS-PAGE결과현시표체산물위상대분자질량36KD적융합단백,Western인적검측순화후단백현시특이성조대.결론 성공구건료pET-32a-Eppin중조질립,병획득료구유항원특이성적가용성Eppin단백,위진일보연구기생물학활성급면역성피잉효응전정료기출.
