蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2010年
3期
496-502
,共7页
郑青亮%须苏菊%周方平%吕正兵%张耀洲
鄭青亮%鬚囌菊%週方平%呂正兵%張耀洲
정청량%수소국%주방평%려정병%장요주
Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂%家蚕%基因克隆%原核表达%荧光定量PCR
Kazal型絲氨痠蛋白酶抑製劑%傢蠶%基因剋隆%原覈錶達%熒光定量PCR
Kazal형사안산단백매억제제%가잠%기인극륭%원핵표체%형광정량PCR
Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用.从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728 bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),且P1活性位点为赖氨酸(K),因此将该基因命名为BmSPI3(GenBank登录号:DN237641).通过PCR扩增BmSPI3基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-BmSPI3,并转化到E.coli BL21(DE3)表达,经SDS-PAGE电泳检测在约36 kD处有明显的蛋白表达条带.提取各发育时期蚕体和5龄幼虫各个组织的总RNA中荧光定量PCR,检测结果表明:BmSPI3在5龄幼虫期表达量最高,卵期最低;在5龄幼虫表皮中的表达量最高,在马氏管的表达量最低.推测BmSPI3对胰蛋白酶和类胰蛋白酶具有抑制作用.
Kazal型絲氨痠蛋白酶抑製劑(SPI)在機體的髮育、免疫等生理過程中髮揮重要的作用.從傢蠶蛹cDNA文庫中穫得一條全長為728 bp的基因序列,對該基因編碼的氨基痠序列進行同源性比對,髮現其蛋白具有保守的Kazal型絲氨痠蛋白酶抑製劑結構域(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),且P1活性位點為賴氨痠(K),因此將該基因命名為BmSPI3(GenBank登錄號:DN237641).通過PCR擴增BmSPI3基因,經BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切後成功構建瞭重組錶達質粒pGEX-4T-1-BmSPI3,併轉化到E.coli BL21(DE3)錶達,經SDS-PAGE電泳檢測在約36 kD處有明顯的蛋白錶達條帶.提取各髮育時期蠶體和5齡幼蟲各箇組織的總RNA中熒光定量PCR,檢測結果錶明:BmSPI3在5齡幼蟲期錶達量最高,卵期最低;在5齡幼蟲錶皮中的錶達量最高,在馬氏管的錶達量最低.推測BmSPI3對胰蛋白酶和類胰蛋白酶具有抑製作用.
Kazal형사안산단백매억제제(SPI)재궤체적발육、면역등생리과정중발휘중요적작용.종가잠용cDNA문고중획득일조전장위728 bp적기인서렬,대해기인편마적안기산서렬진행동원성비대,발현기단백구유보수적Kazal형사안산단백매억제제결구역(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),차P1활성위점위뢰안산(K),인차장해기인명명위BmSPI3(GenBank등록호:DN237641).통과PCR확증BmSPI3기인,경BamHⅠ화XhoⅠ쌍매절후성공구건료중조표체질립pGEX-4T-1-BmSPI3,병전화도E.coli BL21(DE3)표체,경SDS-PAGE전영검측재약36 kD처유명현적단백표체조대.제취각발육시기잠체화5령유충각개조직적총RNA중형광정량PCR,검측결과표명:BmSPI3재5령유충기표체량최고,란기최저;재5령유충표피중적표체량최고,재마씨관적표체량최저.추측BmSPI3대이단백매화류이단백매구유억제작용.
