广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
3期
146-149
,共4页
刘金叶%冯娟%刘广峰%苏友禄%徐力文%郭志勋%王云新
劉金葉%馮娟%劉廣峰%囌友祿%徐力文%郭誌勛%王雲新
류금협%풍연%류엄봉%소우록%서력문%곽지훈%왕운신
鲨鱼弧菌%环介导等温扩增技术%rpoA基因
鯊魚弧菌%環介導等溫擴增技術%rpoA基因
사어호균%배개도등온확증기술%rpoA기인
采用环介导等温扩增技术(LAMP)成功构建了一种鲨鱼弧菌的检测方法.根据鲨鱼弧菌的rpoA基因序列设计4条引物(内引物F3和B3,外引物FIP和BIP),并对LAMP扩增反应的各物质浓度和反应条件进行优化,确定最佳反应温度为65C,最佳反应时间为55 main.该法对鲨鱼弧菌纯菌培养物的检测浓度约为2.4×102 CFU/mL,结果比PCR法具有相似或更高的灵敏度,而且操作简单,反应后体系变浑浊,肉眼可辨；加入SRYB Gold荧光染料,阳性反应为绿色,阴性对照为浅橘色,更便于观察,有望发展成为快速检测鲨鱼弧菌的一种有效方法.
採用環介導等溫擴增技術(LAMP)成功構建瞭一種鯊魚弧菌的檢測方法.根據鯊魚弧菌的rpoA基因序列設計4條引物(內引物F3和B3,外引物FIP和BIP),併對LAMP擴增反應的各物質濃度和反應條件進行優化,確定最佳反應溫度為65C,最佳反應時間為55 main.該法對鯊魚弧菌純菌培養物的檢測濃度約為2.4×102 CFU/mL,結果比PCR法具有相似或更高的靈敏度,而且操作簡單,反應後體繫變渾濁,肉眼可辨；加入SRYB Gold熒光染料,暘性反應為綠色,陰性對照為淺橘色,更便于觀察,有望髮展成為快速檢測鯊魚弧菌的一種有效方法.
채용배개도등온확증기술(LAMP)성공구건료일충사어호균적검측방법.근거사어호균적rpoA기인서렬설계4조인물(내인물F3화B3,외인물FIP화BIP),병대LAMP확증반응적각물질농도화반응조건진행우화,학정최가반응온도위65C,최가반응시간위55 main.해법대사어호균순균배양물적검측농도약위2.4×102 CFU/mL,결과비PCR법구유상사혹경고적령민도,이차조작간단,반응후체계변혼탁,육안가변；가입SRYB Gold형광염료,양성반응위록색,음성대조위천귤색,경편우관찰,유망발전성위쾌속검측사어호균적일충유효방법.
