上海免疫学杂志
上海免疫學雜誌
상해면역학잡지
SHANGHAI JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2001年
3期
173-176
,共4页
马泓%吴健%孙素莲%何洛文%寿成超
馬泓%吳健%孫素蓮%何洛文%壽成超
마홍%오건%손소련%하락문%수성초
CD154%克隆%表达%抗体%制备
CD154%剋隆%錶達%抗體%製備
CD154%극륭%표체%항체%제비
本研究目的是获得特异性抗人CD154单克隆抗体.利用特异引物,通过RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增出编码CD154分子的cDNA全长,将其克隆在谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX4T-3中,转染大肠杆菌Jm109经诱导获得GST-CD154表达.融合蛋白经分离纯化后,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术,通过ELISA双筛,得到2株抗CD154单抗(1D3和5H4).其亚型分别是IgG2a和IgG1.又将CD154 cDNA全长构建真核表达载体pcDNA3-CD154,并转染COS细胞,以G418筛选后,经RT-PCR结果证实pcDNA3-CD154已成功转染COS细胞.所获单抗对转染CD154的COS细胞和刺激活化的人淋巴细胞有特异性结合反应,为进一步研究单抗功能奠定了实验基础.
本研究目的是穫得特異性抗人CD154單剋隆抗體.利用特異引物,通過RT-PCR從人外週血淋巴細胞中擴增齣編碼CD154分子的cDNA全長,將其剋隆在穀胱甘肽巰基轉移酶(GST)融閤蛋白錶達載體pGEX4T-3中,轉染大腸桿菌Jm109經誘導穫得GST-CD154錶達.融閤蛋白經分離純化後,免疫Balb/c小鼠,應用雜交瘤技術,通過ELISA雙篩,得到2株抗CD154單抗(1D3和5H4).其亞型分彆是IgG2a和IgG1.又將CD154 cDNA全長構建真覈錶達載體pcDNA3-CD154,併轉染COS細胞,以G418篩選後,經RT-PCR結果證實pcDNA3-CD154已成功轉染COS細胞.所穫單抗對轉染CD154的COS細胞和刺激活化的人淋巴細胞有特異性結閤反應,為進一步研究單抗功能奠定瞭實驗基礎.
본연구목적시획득특이성항인CD154단극륭항체.이용특이인물,통과RT-PCR종인외주혈림파세포중확증출편마CD154분자적cDNA전장,장기극륭재곡광감태구기전이매(GST)융합단백표체재체pGEX4T-3중,전염대장간균Jm109경유도획득GST-CD154표체.융합단백경분리순화후,면역Balb/c소서,응용잡교류기술,통과ELISA쌍사,득도2주항CD154단항(1D3화5H4).기아형분별시IgG2a화IgG1.우장CD154 cDNA전장구건진핵표체재체pcDNA3-CD154,병전염COS세포,이G418사선후,경RT-PCR결과증실pcDNA3-CD154이성공전염COS세포.소획단항대전염CD154적COS세포화자격활화적인림파세포유특이성결합반응,위진일보연구단항공능전정료실험기출.
