生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
5期
662-666
,共5页
莫宏波%白林泉%王胜兰%杨克迁
莫宏波%白林泉%王勝蘭%楊剋遷
막굉파%백림천%왕성란%양극천
接合转移%接合子%接合性质粒%链霉菌
接閤轉移%接閤子%接閤性質粒%鏈黴菌
접합전이%접합자%접합성질립%련매균
以链霉菌质粒SCP2*的衍生质粒pHJLA00为基础,构建了能够在大肠杆菌到链霉菌之间进行高效接合转移的质粒pGH112.pGH112含有在大肠杆菌和链霉菌中复制起始位点,以及分别在大肠杆菌和链霉菌中进行筛选的抗性标记.用pGH112转化Escherichia coli ET12567(pUZ8002)后,与天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor A3(2))、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、变铅青链霉菌(Streptomyces lividans TK54)、毒三素链霉菌(Streptomyces toxytriciniNRRL15443)、委内瑞拉链霉菌(Streptomyces.venezuelae ISP5230)和红色糖多孢菌(Saccharopolypora erythraea)进行接合,发现本文构建的pGH112与pKC1139相比,接合转移效率较高,稳定性好,而且宿主范围较广.把组成型启动子ermE*与绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到本文构建的pGH112,通过接合转移到链霉菌中,gfp获得表达,证明其可以用作基因接合转移的有效工具载体,这为研究链霉菌的基因功能创造了有利条件.
以鏈黴菌質粒SCP2*的衍生質粒pHJLA00為基礎,構建瞭能夠在大腸桿菌到鏈黴菌之間進行高效接閤轉移的質粒pGH112.pGH112含有在大腸桿菌和鏈黴菌中複製起始位點,以及分彆在大腸桿菌和鏈黴菌中進行篩選的抗性標記.用pGH112轉化Escherichia coli ET12567(pUZ8002)後,與天藍鏈黴菌(Streptomyces coelicolor A3(2))、除蟲鏈黴菌(Streptomyces avermitilis)、變鉛青鏈黴菌(Streptomyces lividans TK54)、毒三素鏈黴菌(Streptomyces toxytriciniNRRL15443)、委內瑞拉鏈黴菌(Streptomyces.venezuelae ISP5230)和紅色糖多孢菌(Saccharopolypora erythraea)進行接閤,髮現本文構建的pGH112與pKC1139相比,接閤轉移效率較高,穩定性好,而且宿主範圍較廣.把組成型啟動子ermE*與綠色熒光蛋白基因(gfp)剋隆到本文構建的pGH112,通過接閤轉移到鏈黴菌中,gfp穫得錶達,證明其可以用作基因接閤轉移的有效工具載體,這為研究鏈黴菌的基因功能創造瞭有利條件.
이련매균질립SCP2*적연생질립pHJLA00위기출,구건료능구재대장간균도련매균지간진행고효접합전이적질립pGH112.pGH112함유재대장간균화련매균중복제기시위점,이급분별재대장간균화련매균중진행사선적항성표기.용pGH112전화Escherichia coli ET12567(pUZ8002)후,여천람련매균(Streptomyces coelicolor A3(2))、제충련매균(Streptomyces avermitilis)、변연청련매균(Streptomyces lividans TK54)、독삼소련매균(Streptomyces toxytriciniNRRL15443)、위내서랍련매균(Streptomyces.venezuelae ISP5230)화홍색당다포균(Saccharopolypora erythraea)진행접합,발현본문구건적pGH112여pKC1139상비,접합전이효솔교고,은정성호,이차숙주범위교엄.파조성형계동자ermE*여록색형광단백기인(gfp)극륭도본문구건적pGH112,통과접합전이도련매균중,gfp획득표체,증명기가이용작기인접합전이적유효공구재체,저위연구련매균적기인공능창조료유리조건.
