中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2005年
5期
472-475
,共4页
马翠卿%周育森%王弋嘉%郭彦%管洁%魏林%何玉先
馬翠卿%週育森%王弋嘉%郭彥%管潔%魏林%何玉先
마취경%주육삼%왕익가%곽언%관길%위림%하옥선
严重急性呼吸窘迫综合征病毒(SARS-CoV)%刺突蛋白(S蛋白)%受体结合区
嚴重急性呼吸窘迫綜閤徵病毒(SARS-CoV)%刺突蛋白(S蛋白)%受體結閤區
엄중급성호흡군박종합정병독(SARS-CoV)%자돌단백(S단백)%수체결합구
为了表达SARS-CoV的S蛋白的受体结合区并对其免疫原性进行分析,用PCR方法扩增S蛋白的受体结合区基因片段,克隆至原核表达质粒pET-32a+并在大肠杆菌中表达,应用Western-blot鉴定表达的目的蛋白,而后以该蛋白作为诊断抗原包被酶联板来检测20份SARS病人血清和28份健康人血清,结果原核表达的S蛋白能够和所用的SARS病人血清反应.这提示表达的S重组蛋白具有良好的抗原性.将变性纯化的重组蛋白和复性蛋白分别皮下免疫小鼠,第三次免疫一周后收集抗血清,用ELISA测定抗体和同时测定中和抗体活性.用变性的抗原免疫的小鼠血清均无中和活性;而用复性的蛋白免疫的小鼠产生了中和抗体.实验表明,S蛋白受体结合区无线性中和表位,中和抗体的产生是由构象表位诱导的.提示该蛋白有可能应用于亚单位疫苗的研究.
為瞭錶達SARS-CoV的S蛋白的受體結閤區併對其免疫原性進行分析,用PCR方法擴增S蛋白的受體結閤區基因片段,剋隆至原覈錶達質粒pET-32a+併在大腸桿菌中錶達,應用Western-blot鑒定錶達的目的蛋白,而後以該蛋白作為診斷抗原包被酶聯闆來檢測20份SARS病人血清和28份健康人血清,結果原覈錶達的S蛋白能夠和所用的SARS病人血清反應.這提示錶達的S重組蛋白具有良好的抗原性.將變性純化的重組蛋白和複性蛋白分彆皮下免疫小鼠,第三次免疫一週後收集抗血清,用ELISA測定抗體和同時測定中和抗體活性.用變性的抗原免疫的小鼠血清均無中和活性;而用複性的蛋白免疫的小鼠產生瞭中和抗體.實驗錶明,S蛋白受體結閤區無線性中和錶位,中和抗體的產生是由構象錶位誘導的.提示該蛋白有可能應用于亞單位疫苗的研究.
위료표체SARS-CoV적S단백적수체결합구병대기면역원성진행분석,용PCR방법확증S단백적수체결합구기인편단,극륭지원핵표체질립pET-32a+병재대장간균중표체,응용Western-blot감정표체적목적단백,이후이해단백작위진단항원포피매련판래검측20빈SARS병인혈청화28빈건강인혈청,결과원핵표체적S단백능구화소용적SARS병인혈청반응.저제시표체적S중조단백구유량호적항원성.장변성순화적중조단백화복성단백분별피하면역소서,제삼차면역일주후수집항혈청,용ELISA측정항체화동시측정중화항체활성.용변성적항원면역적소서혈청균무중화활성;이용복성적단백면역적소서산생료중화항체.실험표명,S단백수체결합구무선성중화표위,중화항체적산생시유구상표위유도적.제시해단백유가능응용우아단위역묘적연구.
