中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2006年
25期
115-117
,共3页
肝移植%腺苷三磷酸%CD4阳性T淋巴细胞
肝移植%腺苷三燐痠%CD4暘性T淋巴細胞
간이식%선감삼린산%CD4양성T림파세포
目的:评估三磷酸腺苷生物发光法检测肝移植受者早期CD4+细胞免疫功能的变化.方法:选择2004-06/10在解放军第二军医大学长征医院器官移植研究所进行的30例肝移植受者手术前后(0,1,2,4周)和50例健康志愿者.采用三磷酸腺苷生物发光法通过植物凝血素刺激后CD4+细胞三磷酸腺苷量的变化来监测细胞的免疫功能.①三磷酸腺苷标准品的检测:用培养基将三磷酸腺苷标准品配制成系列浓度:1,10,1×102,1×103和1×104μg/L,加入等量的Celltiter-Gl0TM荧光试剂混匀,取200μL进行测定,取对数制作标准曲线.②样本三磷酸腺苷检测:采集两组人员全血样本(肝素抗凝),置于细胞培养板过夜,加入含有洗涤过的抗人CD4单抗免疫磁粒悬浮液,用磁珠强效分离磁架将CD4+细胞吸于培养孔的一侧,用磷酸盐缓冲液洗3～5次,加入培养基(+体积分数为0.1的胎牛血清),加入Celltiter-Gl0TM试剂,1 h内用荧光仪(发射波长562 nm)读取荧光发光信号,计算其平均数值.③外周血T淋巴细胞亚群检测:肝素钠抗凝血加相应的抗体,放于Q-prep,workstation上处理后上机,计算出阳性细胞的百分率;或标记后的标本同样处理后,加混匀的Flow-Count标准荧光小球到标本管2 h内上机,计算出CD4+细胞的绝对计数.④检测他克莫司血药浓度.结果:①在三磷酸腺苷浓度为1×(100～104)μg/L之间时,三磷酸腺苷标准品与荧光发光信号呈线性关系.直线方程为Y=0.75X+2.37(r=.994 84).②移植组患者三磷酸腺苷明显低于健康人群[(350±191),(735±370)μgL,P＜0.05],术后1周显著下降为(161±107)μg/L,而后逐渐提高.表明肝移植受者的细胞免疫功能术后第1周明显下降,以后逐渐恢复,第4周仍低于术前水平.③反应细胞免疫功能的三磷酸腺苷量与免疫抑制剂他克莫司血药浓度缺乏直接的相关性(r2=0.02).结论:三磷酸腺苷生物发光法有利于正确评估肝移植后患者的细胞免疫功能.
目的:評估三燐痠腺苷生物髮光法檢測肝移植受者早期CD4+細胞免疫功能的變化.方法:選擇2004-06/10在解放軍第二軍醫大學長徵醫院器官移植研究所進行的30例肝移植受者手術前後(0,1,2,4週)和50例健康誌願者.採用三燐痠腺苷生物髮光法通過植物凝血素刺激後CD4+細胞三燐痠腺苷量的變化來鑑測細胞的免疫功能.①三燐痠腺苷標準品的檢測:用培養基將三燐痠腺苷標準品配製成繫列濃度:1,10,1×102,1×103和1×104μg/L,加入等量的Celltiter-Gl0TM熒光試劑混勻,取200μL進行測定,取對數製作標準麯線.②樣本三燐痠腺苷檢測:採集兩組人員全血樣本(肝素抗凝),置于細胞培養闆過夜,加入含有洗滌過的抗人CD4單抗免疫磁粒懸浮液,用磁珠彊效分離磁架將CD4+細胞吸于培養孔的一側,用燐痠鹽緩遲液洗3～5次,加入培養基(+體積分數為0.1的胎牛血清),加入Celltiter-Gl0TM試劑,1 h內用熒光儀(髮射波長562 nm)讀取熒光髮光信號,計算其平均數值.③外週血T淋巴細胞亞群檢測:肝素鈉抗凝血加相應的抗體,放于Q-prep,workstation上處理後上機,計算齣暘性細胞的百分率;或標記後的標本同樣處理後,加混勻的Flow-Count標準熒光小毬到標本管2 h內上機,計算齣CD4+細胞的絕對計數.④檢測他剋莫司血藥濃度.結果:①在三燐痠腺苷濃度為1×(100～104)μg/L之間時,三燐痠腺苷標準品與熒光髮光信號呈線性關繫.直線方程為Y=0.75X+2.37(r=.994 84).②移植組患者三燐痠腺苷明顯低于健康人群[(350±191),(735±370)μgL,P＜0.05],術後1週顯著下降為(161±107)μg/L,而後逐漸提高.錶明肝移植受者的細胞免疫功能術後第1週明顯下降,以後逐漸恢複,第4週仍低于術前水平.③反應細胞免疫功能的三燐痠腺苷量與免疫抑製劑他剋莫司血藥濃度缺乏直接的相關性(r2=0.02).結論:三燐痠腺苷生物髮光法有利于正確評估肝移植後患者的細胞免疫功能.
목적:평고삼린산선감생물발광법검측간이식수자조기CD4+세포면역공능적변화.방법:선택2004-06/10재해방군제이군의대학장정의원기관이식연구소진행적30례간이식수자수술전후(0,1,2,4주)화50례건강지원자.채용삼린산선감생물발광법통과식물응혈소자격후CD4+세포삼린산선감량적변화래감측세포적면역공능.①삼린산선감표준품적검측:용배양기장삼린산선감표준품배제성계렬농도:1,10,1×102,1×103화1×104μg/L,가입등량적Celltiter-Gl0TM형광시제혼균,취200μL진행측정,취대수제작표준곡선.②양본삼린산선감검측:채집량조인원전혈양본(간소항응),치우세포배양판과야,가입함유세조과적항인CD4단항면역자립현부액,용자주강효분리자가장CD4+세포흡우배양공적일측,용린산염완충액세3～5차,가입배양기(+체적분수위0.1적태우혈청),가입Celltiter-Gl0TM시제,1 h내용형광의(발사파장562 nm)독취형광발광신호,계산기평균수치.③외주혈T림파세포아군검측:간소납항응혈가상응적항체,방우Q-prep,workstation상처리후상궤,계산출양성세포적백분솔;혹표기후적표본동양처리후,가혼균적Flow-Count표준형광소구도표본관2 h내상궤,계산출CD4+세포적절대계수.④검측타극막사혈약농도.결과:①재삼린산선감농도위1×(100～104)μg/L지간시,삼린산선감표준품여형광발광신호정선성관계.직선방정위Y=0.75X+2.37(r=.994 84).②이식조환자삼린산선감명현저우건강인군[(350±191),(735±370)μgL,P＜0.05],술후1주현저하강위(161±107)μg/L,이후축점제고.표명간이식수자적세포면역공능술후제1주명현하강,이후축점회복,제4주잉저우술전수평.③반응세포면역공능적삼린산선감량여면역억제제타극막사혈약농도결핍직접적상관성(r2=0.02).결론:삼린산선감생물발광법유리우정학평고간이식후환자적세포면역공능.
