CAJ | 학술논문

目的:构建cEGFR-rFc融合DNA疫苗, 观察其对小鼠黑素移植瘤的抑制作用.方法:以异种同源鸡EGFR(chicken EGFR,cEGFR)膜外部分与兔疫球蛋白IgG的Fc段(rabbit IgG Fc,rFc)为基础构建真核表达载体pVAX1/cEGFR-rFc,脂质体法转染黑素瘤B16 细胞,免疫荧光法检测融合蛋白在B16细胞中的表达;以融合DNA疫苗免疫C57BL/6J小鼠,Western blotting法检测融合蛋白在小鼠体内的稳定表达.疫苗免疫小鼠接种B16黑素瘤细胞,14 d后处死部分小鼠,取出瘤体称重,计算抑瘤率;同时观察小鼠荷瘤后的生存率;ELASIA法检测DNA疫苗免疫小鼠血清抗EGFR抗体滴度,流式细胞仪测定小鼠脾细胞淋巴细胞亚群.结果:成功构建融合DNA疫苗pVAX1/ cEGFR-rFc,重组载体转染B16细胞后能检测到融合蛋白显著表达,疫苗免疫小鼠后能检测融合蛋白体内稳定表达.融合DNA疫苗能够延缓小鼠黑素移植瘤的生长,抑瘤率为54%(P<0.01);能延长荷瘤小鼠的生存期(疫苗组小鼠接种瘤细胞后30 d的生存率为40%);融合DNA疫苗诱发小鼠产生高滴度抗EGFR抗体(效价1∶1 000)和T细胞免疫(疫苗组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞数目显著增加, P<0.01).结论:cEGFR-rFc融合DNA疫苗能产生有效对抗黑素瘤B16细胞的免疫效应.
목적:구건cEGFR-rFc융합DNA역묘, 관찰기대소서흑소이식류적억제작용.방법:이이충동원계EGFR(chicken EGFR,cEGFR)막외부분여토역구단백IgG적Fc단(rabbit IgG Fc,rFc)위기출구건진핵표체재체pVAX1/cEGFR-rFc,지질체법전염흑소류B16 세포,면역형광법검측융합단백재B16세포중적표체;이융합DNA역묘면역C57BL/6J소서,Western blotting법검측융합단백재소서체내적은정표체.역묘면역소서접충B16흑소류세포,14 d후처사부분소서,취출류체칭중,계산억류솔;동시관찰소서하류후적생존솔;ELASIA법검측DNA역묘면역소서혈청항EGFR항체적도,류식세포의측정소서비세포림파세포아군.결과:성공구건융합DNA역묘pVAX1/ cEGFR-rFc,중조재체전염B16세포후능검측도융합단백현저표체,역묘면역소서후능검측융합단백체내은정표체.융합DNA역묘능구연완소서흑소이식류적생장,억류솔위54%(P<0.01);능연장하류소서적생존기(역묘조소서접충류세포후30 d적생존솔위40%);융합DNA역묘유발소서산생고적도항EGFR항체(효개1∶1 000)화T세포면역(역묘조소서비장CD8+T림파세포수목현저증가, P<0.01).결론:cEGFR-rFc융합DNA역묘능산생유효대항흑소류B16세포적면역효응.