CAJ | 학술논문

背景:目前人胚胎干细胞建系的技术路线主要有囊胚法、核移植法和胚胎单卵裂球法,但由于破坏胚胎,涉及诸多伦理问题.目的:探讨利用冷冻胚胎建立人类胚胎干细胞系的可行性.设计、时间及地点:细胞学体内外实验,于2005-01/2006-08在沈阳市妇婴医院生殖中心完成.材料:妊娠13.5 d的ICR鼠20只用于制备小鼠胚胎成纤维细胞饲养层,10周龄SICD鼠2只用于人胚胎干细胞体内分化实验.行IVF/ICSI助孕患者自愿捐献的冷冻胚胎,由沈阳市妇婴医院生殖中心提供.方法:复苏冷冻的胚胎,采用序贯培养法进行囊胚培养,用免疫外科方法去除滋养细胞,将得到的胚胎内细胞团接种于丝裂霉素C灭活的小鼠胚胎成纤维细胞上培养并传代.主要观察指标:取不同代次的培养细胞,分别进行生长特性、碱性磷酸酶染色、转录因子OCT-4、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、SSEA-1、肿瘤排斥抗原TRA-1-60、TAR-1-81、核型及体内分化全能性鉴定.结果:20个解冻卵裂期胚胎,获得9个囊胚,分离完整的内细胞团共7个,从7个内细胞团培养出2个人胚胎干细胞系,其中一个细胞系连续培养76代(20个月).所培养的细胞具有人胚胎干细胞的共同生物学特性,即细胞呈扁平或圆形,可见1～3个核仁;碱性磷酸酶以及SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-81,TRA-1-60,OCT-4均呈阳性表达,而SSEA-1呈阴性;核型正常,为46,XX核型;将细胞注射入SCID鼠皮下形成肿瘤,病理切片显示为成熟畸胎瘤;短串联重复分型结果显示所形成的畸胎瘤与人胚胎干细胞为相同的遗传背景.结论:实施体外受精-胚胎移植的夫妇怀孕后,多余的冷冻保存胚胎所分离培养的细胞具备人胚胎干细胞的所有特性,是建立人胚胎干细胞系很好的材料来源.
배경:목전인배태간세포건계적기술로선주요유낭배법、핵이식법화배태단란렬구법,단유우파배배태,섭급제다윤리문제.목적:탐토이용냉동배태건립인류배태간세포계적가행성.설계、시간급지점:세포학체내외실험,우2005-01/2006-08재침양시부영의원생식중심완성.재료:임신13.5 d적ICR서20지용우제비소서배태성섬유세포사양층,10주령SICD서2지용우인배태간세포체내분화실험.행IVF/ICSI조잉환자자원연헌적냉동배태,유침양시부영의원생식중심제공.방법:복소냉동적배태,채용서관배양법진행낭배배양,용면역외과방법거제자양세포,장득도적배태내세포단접충우사렬매소C멸활적소서배태성섬유세포상배양병전대.주요관찰지표:취불동대차적배양세포,분별진행생장특성、감성린산매염색、전록인자OCT-4、계단특이성배태항원SSEA-4、SSEA-1、종류배척항원TRA-1-60、TAR-1-81、핵형급체내분화전능성감정.결과:20개해동란렬기배태,획득9개낭배,분리완정적내세포단공7개,종7개내세포단배양출2개인배태간세포계,기중일개세포계련속배양76대(20개월).소배양적세포구유인배태간세포적공동생물학특성,즉세포정편평혹원형,가견1～3개핵인;감성린산매이급SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-81,TRA-1-60,OCT-4균정양성표체,이SSEA-1정음성;핵형정상,위46,XX핵형;장세포주사입SCID서피하형성종류,병리절편현시위성숙기태류;단천련중복분형결과현시소형성적기태류여인배태간세포위상동적유전배경.결론:실시체외수정-배태이식적부부부잉후,다여적냉동보존배태소분리배양적세포구비인배태간세포적소유특성,시건립인배태간세포계흔호적재료래원.