中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
37期
7286-7290
,共5页
张健琦%李文娟%王臻臻%田聆%薛京伦%陈金中
張健琦%李文娟%王臻臻%田聆%薛京倫%陳金中
장건기%리문연%왕진진%전령%설경륜%진금중
phiC31整合酶%锌指蛋白403%基因治疗%蛋白表达
phiC31整閤酶%鋅指蛋白403%基因治療%蛋白錶達
phiC31정합매%자지단백403%기인치료%단백표체
背景:phiC31是重要的基因治疗工具酶,其与细胞内蛋白的相互作用可能影响细胞内各种通路,从而关系到基因治疗的安全性.目的:构建锌指蛋白403基因原核表达载体,观察其在真核细胞的表达情况.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-10/2008-12在复旦大学遗传工程国家重点实验室完成.材料:大肠杆菌DH5a菌株及大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株均为实验室保存.方法:用pLexA-phiC31作为"诱饵",对人胎脑cDNA文库通过酵母双杂交进行筛查,分离阳性克隆.对锌指蛋白403基因构建原核表达载体并纯化鉴定.脂质体介导真核细胞进行转染并细胞定位观察.主要观察指标:锌指蛋白403的原核表达载体的构建、纯化及在真核细胞细胞质中定位的结果.结果:酵母双杂交进行筛查后分离61个阳性克隆中,有1个包含17号染色体17q12上的基因序列,其具有一个锌指结构,故名锌指蛋白403.成功构建了锌指蛋白403的原核表达载体,并纯化组氨酸标记的锌指蛋白403.在真核细胞中,构建了绿荧光融合载体,证明了此蛋白在细胞质中的定位.结论:实验结果发现了一个新的phiC31整合酶相互作用蛋白,成功构建了znf403基因的原核表达载体,znf403蛋白主要在细胞质中聚集和分布.
揹景:phiC31是重要的基因治療工具酶,其與細胞內蛋白的相互作用可能影響細胞內各種通路,從而關繫到基因治療的安全性.目的:構建鋅指蛋白403基因原覈錶達載體,觀察其在真覈細胞的錶達情況.設計、時間及地點:單一樣本觀察,于2007-10/2008-12在複旦大學遺傳工程國傢重點實驗室完成.材料:大腸桿菌DH5a菌株及大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株均為實驗室保存.方法:用pLexA-phiC31作為"誘餌",對人胎腦cDNA文庫通過酵母雙雜交進行篩查,分離暘性剋隆.對鋅指蛋白403基因構建原覈錶達載體併純化鑒定.脂質體介導真覈細胞進行轉染併細胞定位觀察.主要觀察指標:鋅指蛋白403的原覈錶達載體的構建、純化及在真覈細胞細胞質中定位的結果.結果:酵母雙雜交進行篩查後分離61箇暘性剋隆中,有1箇包含17號染色體17q12上的基因序列,其具有一箇鋅指結構,故名鋅指蛋白403.成功構建瞭鋅指蛋白403的原覈錶達載體,併純化組氨痠標記的鋅指蛋白403.在真覈細胞中,構建瞭綠熒光融閤載體,證明瞭此蛋白在細胞質中的定位.結論:實驗結果髮現瞭一箇新的phiC31整閤酶相互作用蛋白,成功構建瞭znf403基因的原覈錶達載體,znf403蛋白主要在細胞質中聚集和分佈.
배경:phiC31시중요적기인치료공구매,기여세포내단백적상호작용가능영향세포내각충통로,종이관계도기인치료적안전성.목적:구건자지단백403기인원핵표체재체,관찰기재진핵세포적표체정황.설계、시간급지점:단일양본관찰,우2007-10/2008-12재복단대학유전공정국가중점실험실완성.재료:대장간균DH5a균주급대장간균Rosetta(DE3)균주균위실험실보존.방법:용pLexA-phiC31작위"유이",대인태뇌cDNA문고통과효모쌍잡교진행사사,분리양성극륭.대자지단백403기인구건원핵표체재체병순화감정.지질체개도진핵세포진행전염병세포정위관찰.주요관찰지표:자지단백403적원핵표체재체적구건、순화급재진핵세포세포질중정위적결과.결과:효모쌍잡교진행사사후분리61개양성극륭중,유1개포함17호염색체17q12상적기인서렬,기구유일개자지결구,고명자지단백403.성공구건료자지단백403적원핵표체재체,병순화조안산표기적자지단백403.재진핵세포중,구건료록형광융합재체,증명료차단백재세포질중적정위.결론:실험결과발현료일개신적phiC31정합매상호작용단백,성공구건료znf403기인적원핵표체재체,znf403단백주요재세포질중취집화분포.