广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
5期
598-600
,共3页
蔡丽娟%陈瑶%杜红延%陈骊嘉%李明
蔡麗娟%陳瑤%杜紅延%陳驪嘉%李明
채려연%진요%두홍연%진려가%리명
柯萨奇病A组16型%TaqMan探针%一步法荧光定量RT-PCR%检测
柯薩奇病A組16型%TaqMan探針%一步法熒光定量RT-PCR%檢測
가살기병A조16형%TaqMan탐침%일보법형광정량RT-PCR%검측
目的 建立一种快速、灵敏、特异和准确的一步法荧光定量RT-PCR方法 用于检测柯萨奇病毒A组16型(Coxsackieviruses A16,CoxA16).方法 根据GenBank登录的CoxA16基因序列,应用生物学软件进行同源性序列比对后,选出CoxA16高度保守且特异的核苷酸区域polyprotein 基因,设计特异性引物和TaqMan探针;构建重组质粒作为阳性标准品,建立检测CoxA16的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,并对该方法 的特异性、敏感性、重复性进行评价.结果 成功建立了CoxA16的FQ-PCR检测方法 和定量标准曲线,该方法 最低检测限为101个拷贝/μL,与常规PCR相比,敏感性提高100倍.组内和组间重复性实验的变异系数小于2%.该检测方法 特异性强,与肠道病毒71型、柯萨奇病毒B组5型、脊髓灰质炎病毒、肠道病毒75型、登革热病毒、霍乱弧菌O1、霍乱弧菌O139、大肠杆菌O157均不发生交叉反应.结论 本实验建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法 灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于CoxA16感染的日常检测和实验室早期快速诊断.
目的 建立一種快速、靈敏、特異和準確的一步法熒光定量RT-PCR方法 用于檢測柯薩奇病毒A組16型(Coxsackieviruses A16,CoxA16).方法 根據GenBank登錄的CoxA16基因序列,應用生物學軟件進行同源性序列比對後,選齣CoxA16高度保守且特異的覈苷痠區域polyprotein 基因,設計特異性引物和TaqMan探針;構建重組質粒作為暘性標準品,建立檢測CoxA16的TaqMan熒光定量RT-PCR方法,併對該方法 的特異性、敏感性、重複性進行評價.結果 成功建立瞭CoxA16的FQ-PCR檢測方法 和定量標準麯線,該方法 最低檢測限為101箇拷貝/μL,與常規PCR相比,敏感性提高100倍.組內和組間重複性實驗的變異繫數小于2%.該檢測方法 特異性彊,與腸道病毒71型、柯薩奇病毒B組5型、脊髓灰質炎病毒、腸道病毒75型、登革熱病毒、霍亂弧菌O1、霍亂弧菌O139、大腸桿菌O157均不髮生交扠反應.結論 本實驗建立的TaqMan熒光定量RT-PCR檢測方法 靈敏度高、特異性彊、重複性好,可用于CoxA16感染的日常檢測和實驗室早期快速診斷.
목적 건립일충쾌속、령민、특이화준학적일보법형광정량RT-PCR방법 용우검측가살기병독A조16형(Coxsackieviruses A16,CoxA16).방법 근거GenBank등록적CoxA16기인서렬,응용생물학연건진행동원성서렬비대후,선출CoxA16고도보수차특이적핵감산구역polyprotein 기인,설계특이성인물화TaqMan탐침;구건중조질립작위양성표준품,건립검측CoxA16적TaqMan형광정량RT-PCR방법,병대해방법 적특이성、민감성、중복성진행평개.결과 성공건립료CoxA16적FQ-PCR검측방법 화정량표준곡선,해방법 최저검측한위101개고패/μL,여상규PCR상비,민감성제고100배.조내화조간중복성실험적변이계수소우2%.해검측방법 특이성강,여장도병독71형、가살기병독B조5형、척수회질염병독、장도병독75형、등혁열병독、곽란호균O1、곽란호균O139、대장간균O157균불발생교차반응.결론 본실험건립적TaqMan형광정량RT-PCR검측방법 령민도고、특이성강、중복성호,가용우CoxA16감염적일상검측화실험실조기쾌속진단.
