中国比较医学杂志
中國比較醫學雜誌
중국비교의학잡지
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
2012年
7期
13-16
,共4页
刘中禄%陶翠兰%莘旭妮%李树民
劉中祿%陶翠蘭%莘旭妮%李樹民
류중록%도취란%신욱니%리수민
重组胸腺素α1%基因克隆%质粒pMAL-C2x%融合表达
重組胸腺素α1%基因剋隆%質粒pMAL-C2x%融閤錶達
중조흉선소α1%기인극륭%질립pMAL-C2x%융합표체
目的 构建表达重组胸腺素α1(Tα1)的pMAL- C2x - Tα1/TBI工程菌.方法 将人工合成的Tα1序列进行PCR扩增,将扩增的片段和pMAL- C2x质粒载体分别经BamHI和EcoR I双酶切后,用T4 DNA快速连接酶连接构建pMAL- C2x - Tα1融合表达质粒,再经测序正确后,将重组体转化至大肠埃希菌TB1菌中,pMAL- C2x -Tα1/TB1菌在LB液体培养基中培养,经IPTG诱导表达麦芽糖结合蛋白与Tα1的融合蛋白(MBP- Tα1),采用Westernblot对MBP- Tα1进行鉴定.结果 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌能有效表达MBP- Tα1,融合蛋白占菌体蛋白的33.6％,分子量约为45×103.结论 工程菌的成功构建和表达为重组Tα1的纯化、生物学活性等研究奠定了基础.
目的 構建錶達重組胸腺素α1(Tα1)的pMAL- C2x - Tα1/TBI工程菌.方法 將人工閤成的Tα1序列進行PCR擴增,將擴增的片段和pMAL- C2x質粒載體分彆經BamHI和EcoR I雙酶切後,用T4 DNA快速連接酶連接構建pMAL- C2x - Tα1融閤錶達質粒,再經測序正確後,將重組體轉化至大腸埃希菌TB1菌中,pMAL- C2x -Tα1/TB1菌在LB液體培養基中培養,經IPTG誘導錶達麥芽糖結閤蛋白與Tα1的融閤蛋白(MBP- Tα1),採用Westernblot對MBP- Tα1進行鑒定.結果 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌能有效錶達MBP- Tα1,融閤蛋白佔菌體蛋白的33.6％,分子量約為45×103.結論 工程菌的成功構建和錶達為重組Tα1的純化、生物學活性等研究奠定瞭基礎.
목적 구건표체중조흉선소α1(Tα1)적pMAL- C2x - Tα1/TBI공정균.방법 장인공합성적Tα1서렬진행PCR확증,장확증적편단화pMAL- C2x질립재체분별경BamHI화EcoR I쌍매절후,용T4 DNA쾌속련접매련접구건pMAL- C2x - Tα1융합표체질립,재경측서정학후,장중조체전화지대장애희균TB1균중,pMAL- C2x -Tα1/TB1균재LB액체배양기중배양,경IPTG유도표체맥아당결합단백여Tα1적융합단백(MBP- Tα1),채용Westernblot대MBP- Tα1진행감정.결과 pMAL-C2x-Tα1/TB1공정균능유효표체MBP- Tα1,융합단백점균체단백적33.6％,분자량약위45×103.결론 공정균적성공구건화표체위중조Tα1적순화、생물학활성등연구전정료기출.
