中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2006年
1期
54-57
,共4页
饶桂荣%陈文吟%粟宽源%任向荣%郑业华%余宙耀
饒桂榮%陳文吟%粟寬源%任嚮榮%鄭業華%餘宙耀
요계영%진문음%속관원%임향영%정업화%여주요
抗HBs抗体%Fab片段%纯化%结构
抗HBs抗體%Fab片段%純化%結構
항HBs항체%Fab편단%순화%결구
目的研究重组人抗HBs-Fab抗体的纯化工艺,并对其结构等特性进行分析.方法采用离子交换-分子筛层析法分离纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAg Fab抗体,并经ELISA检测其抗体活性,等电聚焦电泳法检测其等电点(pI),基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量和肽质量图谱.结果纯化的重组Fab抗体的纯度可达90%以上,经Sephacryl-100进一步层析后,纯度达99%以上,总收率可达80%以上.Fab抗体具有较好的抗体活性,其pI值为7.6,为一碱性蛋白,相对分子质量为50 494,比其理论值约多2 579.35,经Endoglycosidase H内切酶消化后的相对分子质量为49 609,证明Fab的一级结构中有糖基化现象,且分布于Fab抗体的H链和L链上.胰酶酶解肽段中有21个与理论肽段相符,另检测到1对二硫键正确.结论已建立了重组人抗HBs-Fab抗体的稳定的纯化工艺,且Fab抗体的一级结构正确.
目的研究重組人抗HBs-Fab抗體的純化工藝,併對其結構等特性進行分析.方法採用離子交換-分子篩層析法分離純化由酵母工程菌(GS115/Fab)髮酵的重組人抗HBsAg Fab抗體,併經ELISA檢測其抗體活性,等電聚焦電泳法檢測其等電點(pI),基質輔助激光解吸飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)檢測其相對分子質量和肽質量圖譜.結果純化的重組Fab抗體的純度可達90%以上,經Sephacryl-100進一步層析後,純度達99%以上,總收率可達80%以上.Fab抗體具有較好的抗體活性,其pI值為7.6,為一堿性蛋白,相對分子質量為50 494,比其理論值約多2 579.35,經Endoglycosidase H內切酶消化後的相對分子質量為49 609,證明Fab的一級結構中有糖基化現象,且分佈于Fab抗體的H鏈和L鏈上.胰酶酶解肽段中有21箇與理論肽段相符,另檢測到1對二硫鍵正確.結論已建立瞭重組人抗HBs-Fab抗體的穩定的純化工藝,且Fab抗體的一級結構正確.
목적연구중조인항HBs-Fab항체적순화공예,병대기결구등특성진행분석.방법채용리자교환-분자사층석법분리순화유효모공정균(GS115/Fab)발효적중조인항HBsAg Fab항체,병경ELISA검측기항체활성,등전취초전영법검측기등전점(pI),기질보조격광해흡비행시간질보(MALDI-TOF-MS)검측기상대분자질량화태질량도보.결과순화적중조Fab항체적순도가체90%이상,경Sephacryl-100진일보층석후,순도체99%이상,총수솔가체80%이상.Fab항체구유교호적항체활성,기pI치위7.6,위일감성단백,상대분자질량위50 494,비기이론치약다2 579.35,경Endoglycosidase H내절매소화후적상대분자질량위49 609,증명Fab적일급결구중유당기화현상,차분포우Fab항체적H련화L련상.이매매해태단중유21개여이론태단상부,령검측도1대이류건정학.결론이건립료중조인항HBs-Fab항체적은정적순화공예,차Fab항체적일급결구정학.
