中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2006年
12期
34-39
,共6页
王昌梅%王同映%杨志愉%单剑峰%刘晓妮%马国昌%戎亚雯%方井晋%黄岩山%周金宝
王昌梅%王同映%楊誌愉%單劍峰%劉曉妮%馬國昌%戎亞雯%方井晉%黃巖山%週金寶
왕창매%왕동영%양지유%단검봉%류효니%마국창%융아문%방정진%황암산%주금보
HSA-hG-CSF融合蛋白%毕氏酵母%融合表达
HSA-hG-CSF融閤蛋白%畢氏酵母%融閤錶達
HSA-hG-CSF융합단백%필씨효모%융합표체
为了延长G-CSF半衰期,利用甲醇酵母表达重组人血清白蛋白融合的集落细胞刺激因子(rHSA-G-CSF).用PCR方法从人胎肝cDNA文库扩增出HSA cDNA序列,hG-CSFcDNA序列从大肠表达载体中酶切获取.将HSA和hG-CSF两片段连接后,克隆到酵母分泌型表达载体pGENYK中,酶切线性化后原生质体转化导入酵母细胞进行整合.工程菌经发酵罐培养表达,层析法分离纯化融合蛋白.纯化的融合蛋白经Western印迹分析表明具有HSA和G-CSF的免疫原性,体外生物学活性分析表明,同等尔数的融合表达产物的活性为E.coli表达G-CSF单体的活性的50%以上.体内动物实验研究表明,经HSA融合的G-CSF的半衰期为G-CSF单体的15～20倍.甲醇酵母表达的融合HSA的G-CSF具有比G-CSF更长的半衰期,有良好的临床应用前景.
為瞭延長G-CSF半衰期,利用甲醇酵母錶達重組人血清白蛋白融閤的集落細胞刺激因子(rHSA-G-CSF).用PCR方法從人胎肝cDNA文庫擴增齣HSA cDNA序列,hG-CSFcDNA序列從大腸錶達載體中酶切穫取.將HSA和hG-CSF兩片段連接後,剋隆到酵母分泌型錶達載體pGENYK中,酶切線性化後原生質體轉化導入酵母細胞進行整閤.工程菌經髮酵罐培養錶達,層析法分離純化融閤蛋白.純化的融閤蛋白經Western印跡分析錶明具有HSA和G-CSF的免疫原性,體外生物學活性分析錶明,同等爾數的融閤錶達產物的活性為E.coli錶達G-CSF單體的活性的50%以上.體內動物實驗研究錶明,經HSA融閤的G-CSF的半衰期為G-CSF單體的15～20倍.甲醇酵母錶達的融閤HSA的G-CSF具有比G-CSF更長的半衰期,有良好的臨床應用前景.
위료연장G-CSF반쇠기,이용갑순효모표체중조인혈청백단백융합적집락세포자격인자(rHSA-G-CSF).용PCR방법종인태간cDNA문고확증출HSA cDNA서렬,hG-CSFcDNA서렬종대장표체재체중매절획취.장HSA화hG-CSF량편단련접후,극륭도효모분비형표체재체pGENYK중,매절선성화후원생질체전화도입효모세포진행정합.공정균경발효관배양표체,층석법분리순화융합단백.순화적융합단백경Western인적분석표명구유HSA화G-CSF적면역원성,체외생물학활성분석표명,동등이수적융합표체산물적활성위E.coli표체G-CSF단체적활성적50%이상.체내동물실험연구표명,경HSA융합적G-CSF적반쇠기위G-CSF단체적15～20배.갑순효모표체적융합HSA적G-CSF구유비G-CSF경장적반쇠기,유량호적림상응용전경.
