中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2006年
10期
1-6
,共6页
熊盛%钱垂文%黄立%刘秋英%张美英%王一飞
熊盛%錢垂文%黃立%劉鞦英%張美英%王一飛
웅성%전수문%황립%류추영%장미영%왕일비
核苷二磷酸激酶%中试%发酵%纯化
覈苷二燐痠激酶%中試%髮酵%純化
핵감이린산격매%중시%발효%순화
中试规模发酵重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)工程菌,并对表达产物进行纯化.摇瓶培养一级种子至合适密度,以10%比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9.6～10.5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体裂解后,经离子交换层析和亲和层析两步纯化得重组蛋白制品.结果表明,50L培养液经过10h培养后,湿菌收量为1560g/批,NDPK-A表达量为23.8%.另外,补料方式对发酵密度有明显影响.与单纯补加碳源相比,同时补加碳源和氮源可以显著提高菌体产量,但对目的蛋白表达量的提高不明显.在较优条件下,菌体产量为(2220.00±169.71)g/批,蛋白表达量为(22.00±0.42)%,纯化后重组蛋白得率为510mg/L.产物可溶、密度适中、工艺简便的中试发酵条件的建立为高得率、大规模制备重组rhNDPK-A奠定了基础.
中試規模髮酵重組人覈苷二燐痠激酶A(rhNDPK-A)工程菌,併對錶達產物進行純化.搖瓶培養一級種子至閤適密度,以10%比例接種二級種子培養基,在7L髮酵罐中培養至OD600為9.6～10.5,然後轉入80L髮酵罐中進行補料分批培養,所得菌體裂解後,經離子交換層析和親和層析兩步純化得重組蛋白製品.結果錶明,50L培養液經過10h培養後,濕菌收量為1560g/批,NDPK-A錶達量為23.8%.另外,補料方式對髮酵密度有明顯影響.與單純補加碳源相比,同時補加碳源和氮源可以顯著提高菌體產量,但對目的蛋白錶達量的提高不明顯.在較優條件下,菌體產量為(2220.00±169.71)g/批,蛋白錶達量為(22.00±0.42)%,純化後重組蛋白得率為510mg/L.產物可溶、密度適中、工藝簡便的中試髮酵條件的建立為高得率、大規模製備重組rhNDPK-A奠定瞭基礎.
중시규모발효중조인핵감이린산격매A(rhNDPK-A)공정균,병대표체산물진행순화.요병배양일급충자지합괄밀도,이10%비례접충이급충자배양기,재7L발효관중배양지OD600위9.6～10.5,연후전입80L발효관중진행보료분비배양,소득균체렬해후,경리자교환층석화친화층석량보순화득중조단백제품.결과표명,50L배양액경과10h배양후,습균수량위1560g/비,NDPK-A표체량위23.8%.령외,보료방식대발효밀도유명현영향.여단순보가탄원상비,동시보가탄원화담원가이현저제고균체산량,단대목적단백표체량적제고불명현.재교우조건하,균체산량위(2220.00±169.71)g/비,단백표체량위(22.00±0.42)%,순화후중조단백득솔위510mg/L.산물가용、밀도괄중、공예간편적중시발효조건적건립위고득솔、대규모제비중조rhNDPK-A전정료기출.
