基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2009年
10期
1039-1043
,共5页
彭清林%张婷%范东升%郑伟%谢喜秀%许于飞%许雪梅
彭清林%張婷%範東升%鄭偉%謝喜秀%許于飛%許雪梅
팽청림%장정%범동승%정위%사희수%허우비%허설매
人乳头瘤病毒18型%病毒样颗粒%杆状病毒表达系统%抗血清
人乳頭瘤病毒18型%病毒樣顆粒%桿狀病毒錶達繫統%抗血清
인유두류병독18형%병독양과립%간상병독표체계통%항혈청
目的 优化人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1并在昆虫细胞中表达,获得HPV 18 L1病毒样颗粒(VLP),制备豚鼠抗血清.方法 联合利用昆虫细胞偏性密码子、C末端截短32个氨基酸、降低mRNA二级结构等策略优化HPV 18 L1基因,合成后克隆入pFastBacl载体,构建重组病毒,感染sf9昆虫细胞72 h后进行Western blot表达鉴定,密度梯度离心法纯化后进行纯度鉴定及形态学鉴定,获得HPV 18 L1 VLP,联合弗氏佐剂免疫豚鼠制备抗血清.结果 HPV 18 L1优化基因在昆虫细胞中可有效表达,纯化的HPV 18 L1蛋白纯度达90%以上,电镜观察可见直径约为50 nln的VLP,豚鼠免疫血清中HPV 18 L1 VLP特异性抗体滴度达5.12×105.结论 HPV 18 L1优化基因可在昆虫细胞中高效表达并组装成VLP,制备的高滴度抗血清为HPV 18 L1 VLP疫苗的进一步研究打下基础.
目的 優化人乳頭瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1併在昆蟲細胞中錶達,穫得HPV 18 L1病毒樣顆粒(VLP),製備豚鼠抗血清.方法 聯閤利用昆蟲細胞偏性密碼子、C末耑截短32箇氨基痠、降低mRNA二級結構等策略優化HPV 18 L1基因,閤成後剋隆入pFastBacl載體,構建重組病毒,感染sf9昆蟲細胞72 h後進行Western blot錶達鑒定,密度梯度離心法純化後進行純度鑒定及形態學鑒定,穫得HPV 18 L1 VLP,聯閤弗氏佐劑免疫豚鼠製備抗血清.結果 HPV 18 L1優化基因在昆蟲細胞中可有效錶達,純化的HPV 18 L1蛋白純度達90%以上,電鏡觀察可見直徑約為50 nln的VLP,豚鼠免疫血清中HPV 18 L1 VLP特異性抗體滴度達5.12×105.結論 HPV 18 L1優化基因可在昆蟲細胞中高效錶達併組裝成VLP,製備的高滴度抗血清為HPV 18 L1 VLP疫苗的進一步研究打下基礎.
목적 우화인유두류병독(HPV)18형만기기인L1병재곤충세포중표체,획득HPV 18 L1병독양과립(VLP),제비돈서항혈청.방법 연합이용곤충세포편성밀마자、C말단절단32개안기산、강저mRNA이급결구등책략우화HPV 18 L1기인,합성후극륭입pFastBacl재체,구건중조병독,감염sf9곤충세포72 h후진행Western blot표체감정,밀도제도리심법순화후진행순도감정급형태학감정,획득HPV 18 L1 VLP,연합불씨좌제면역돈서제비항혈청.결과 HPV 18 L1우화기인재곤충세포중가유효표체,순화적HPV 18 L1단백순도체90%이상,전경관찰가견직경약위50 nln적VLP,돈서면역혈청중HPV 18 L1 VLP특이성항체적도체5.12×105.결론 HPV 18 L1우화기인가재곤충세포중고효표체병조장성VLP,제비적고적도항혈청위HPV 18 L1 VLP역묘적진일보연구타하기출.
