CAJ | 학술논문

为探讨直接用 1 mL 注射器对睾丸打点注射pIRES2-EGFP建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性.选择4只成年新西兰雄兔,双侧睾丸内分别打点注射 0.5～0.8 mg/mL浓度的质粒 0.25 mL,第 3 周和第 8 周分别取4#和3#雄兔睾丸做冰冻切片,置荧光显微镜下观察是否发绿色荧光.其它雄兔于第 3 周开始参与配种,最后采新生仔兔耳组织提取其基因组进行 PCR 和 Southern 杂交检测阳性率.结果表明,雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR 和 Southern 杂交检测表明在睾丸注射后的第 6 周和第 7 周进行配种所得后代阳性率最高.不同雄兔后代经 PCR 和 Southern 杂交检测平均阳性率存在差异(P<0.05),2#雄兔后代平均阳性率达到 56.46%,3#雄兔的最低达36.96%的阳性率.表明用注射器直接对睾丸打点注射外源基因生产转基因的方法操作简便、高效,为大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础.
위탐토직접용 1 mL 주사기대고환타점주사pIRES2-EGFP건립조작방편、효솔고、성본저、가비량생산전기인토적가행성.선택4지성년신서란웅토,쌍측고환내분별타점주사 0.5～0.8 mg/mL농도적질립 0.25 mL,제 3 주화제 8 주분별취4#화3#웅토고환주빙동절편,치형광현미경하관찰시부발록색형광.기타웅토우제 3 주개시삼여배충,최후채신생자토이조직제취기기인조진행 PCR 화 Southern 잡교검측양성솔.결과표명,웅토고환빙동절편우형광현미경하가견록색형광,PCR 화 Southern 잡교검측표명재고환주사후적제 6 주화제 7 주진행배충소득후대양성솔최고.불동웅토후대경 PCR 화 Southern 잡교검측평균양성솔존재차이(P<0.05),2#웅토후대평균양성솔체도 56.46%,3#웅토적최저체36.96%적양성솔.표명용주사기직접대고환타점주사외원기인생산전기인적방법조작간편、고효,위대규모제비일사대형가축적전기인후대전정료기출.