现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2011年
9期
1720-1723
,共4页
姜影%杜金荣%佟丹丹%娄阁%吴丽华%石岩
薑影%杜金榮%佟丹丹%婁閣%吳麗華%石巖
강영%두금영%동단단%루각%오려화%석암
RUNX3基因%T47D细胞%乳腺癌
RUNX3基因%T47D細胞%乳腺癌
RUNX3기인%T47D세포%유선암
目的:构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-RUNX3,并在乳腺癌T47D细胞株中表达.方法:应用基因重组技术和限制性内切酶EcoRI和XhoI酶切,构建并鉴定pcDNA3.1(+)-RUNX3真核表达载体,经脂质体Lipofectamine2000介导质粒转染T47D细胞后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot实验,检测RUNX3在T47D细胞中的表达.结果:重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-RUNX3经限制性内切酶EcoRI和XhoI酶切,电泳后显示1.3kb的RUNX3目的片段和5.4kb的pcDNA3.1(+)载体片段.测序证实酶切片段与gene bank中登记的RUNX3序列相同,证实pcDNA3.1(+)-RUNX3真核表达载体构建成功.经RT-PCR和Western blot检测,表明转染pcDNA3.1(+)-RUNX3的T47D细胞RUNX3阳性表达.结论:重组真核表达载体构建正确,并建立稳定表达RUNX3的T47D细胞系,从而为后续研究提供有用的细胞研究模型.
目的:構建真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-RUNX3,併在乳腺癌T47D細胞株中錶達.方法:應用基因重組技術和限製性內切酶EcoRI和XhoI酶切,構建併鑒定pcDNA3.1(+)-RUNX3真覈錶達載體,經脂質體Lipofectamine2000介導質粒轉染T47D細胞後應用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和Western blot實驗,檢測RUNX3在T47D細胞中的錶達.結果:重組真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-RUNX3經限製性內切酶EcoRI和XhoI酶切,電泳後顯示1.3kb的RUNX3目的片段和5.4kb的pcDNA3.1(+)載體片段.測序證實酶切片段與gene bank中登記的RUNX3序列相同,證實pcDNA3.1(+)-RUNX3真覈錶達載體構建成功.經RT-PCR和Western blot檢測,錶明轉染pcDNA3.1(+)-RUNX3的T47D細胞RUNX3暘性錶達.結論:重組真覈錶達載體構建正確,併建立穩定錶達RUNX3的T47D細胞繫,從而為後續研究提供有用的細胞研究模型.
목적:구건진핵표체재체pcDNA3.1(+)-RUNX3,병재유선암T47D세포주중표체.방법:응용기인중조기술화한제성내절매EcoRI화XhoI매절,구건병감정pcDNA3.1(+)-RUNX3진핵표체재체,경지질체Lipofectamine2000개도질립전염T47D세포후응용역전록-취합매련반응(RT-PCR)화Western blot실험,검측RUNX3재T47D세포중적표체.결과:중조진핵표체재체pcDNA3.1(+)-RUNX3경한제성내절매EcoRI화XhoI매절,전영후현시1.3kb적RUNX3목적편단화5.4kb적pcDNA3.1(+)재체편단.측서증실매절편단여gene bank중등기적RUNX3서렬상동,증실pcDNA3.1(+)-RUNX3진핵표체재체구건성공.경RT-PCR화Western blot검측,표명전염pcDNA3.1(+)-RUNX3적T47D세포RUNX3양성표체.결론:중조진핵표체재체구건정학,병건립은정표체RUNX3적T47D세포계,종이위후속연구제공유용적세포연구모형.
