国际生物医学工程杂志
國際生物醫學工程雜誌
국제생물의학공정잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOMEDICAL ENGINEERING
2012年
3期
151-154,后插3
,共5页
肿瘤坏死因子-α%B16细胞%自体吞噬
腫瘤壞死因子-α%B16細胞%自體吞噬
종류배사인자-α%B16세포%자체탄서
Tumor necrosis factor-α%B16 cells%Autophagy
目的 研究肿瘤坏死因子a(TNF-a)诱导小鼠黑色素瘤B16细胞自体吞噬和自噬性死亡的作用.方法体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,TN F-a(20ng/ml)处理后不同时间点(12、24h)分别收取细胞,相差显微镜观察TNF-α处理前后B16细胞的生存状态,透射电子显微镜(TEM)观察TNF-a处理前后B16细胞内双层膜结构自体吞噬泡的情况,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹分析自噬标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3]和Beclin1以及自噬相关基因(Atg)Atg5、Atg7、Atg12表达的变化,以LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值作为自噬活性的指标,以Beclin1作为自噬性死亡的指标.结果TNF-a处理B16细胞24 h后自体吞噬泡数量增多.与对照组相比,TNF-α持续作用可以诱导自噬标记物LC3-Ⅱ和自噬性死亡标记物Beclin1蛋白表达增高,并且呈时间依赖性；同时自噬相关基因Atg5、Atg7 、Atg12 mRNA的表达在TNF-a处理12、24h后显著增高.结论TNF-α除了可以诱导B16细胞凋亡,还可诱导B16细胞发生自体吞噬并导致自噬性死亡.
目的 研究腫瘤壞死因子a(TNF-a)誘導小鼠黑色素瘤B16細胞自體吞噬和自噬性死亡的作用.方法體外培養小鼠黑色素瘤B16細胞,TN F-a(20ng/ml)處理後不同時間點(12、24h)分彆收取細胞,相差顯微鏡觀察TNF-α處理前後B16細胞的生存狀態,透射電子顯微鏡(TEM)觀察TNF-a處理前後B16細胞內雙層膜結構自體吞噬泡的情況,反轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)、蛋白免疫印跡分析自噬標記物微管相關蛋白1輕鏈3(LC3]和Beclin1以及自噬相關基因(Atg)Atg5、Atg7、Atg12錶達的變化,以LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值作為自噬活性的指標,以Beclin1作為自噬性死亡的指標.結果TNF-a處理B16細胞24 h後自體吞噬泡數量增多.與對照組相比,TNF-α持續作用可以誘導自噬標記物LC3-Ⅱ和自噬性死亡標記物Beclin1蛋白錶達增高,併且呈時間依賴性；同時自噬相關基因Atg5、Atg7 、Atg12 mRNA的錶達在TNF-a處理12、24h後顯著增高.結論TNF-α除瞭可以誘導B16細胞凋亡,還可誘導B16細胞髮生自體吞噬併導緻自噬性死亡.
목적 연구종류배사인자a(TNF-a)유도소서흑색소류B16세포자체탄서화자서성사망적작용.방법체외배양소서흑색소류B16세포,TN F-a(20ng/ml)처리후불동시간점(12、24h)분별수취세포,상차현미경관찰TNF-α처리전후B16세포적생존상태,투사전자현미경(TEM)관찰TNF-a처리전후B16세포내쌍층막결구자체탄서포적정황,반전록취합매련식반응(RT-PCR)、단백면역인적분석자서표기물미관상관단백1경련3(LC3]화Beclin1이급자서상관기인(Atg)Atg5、Atg7、Atg12표체적변화,이LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ적비치작위자서활성적지표,이Beclin1작위자서성사망적지표.결과TNF-a처리B16세포24 h후자체탄서포수량증다.여대조조상비,TNF-α지속작용가이유도자서표기물LC3-Ⅱ화자서성사망표기물Beclin1단백표체증고,병차정시간의뢰성；동시자서상관기인Atg5、Atg7 、Atg12 mRNA적표체재TNF-a처리12、24h후현저증고.결론TNF-α제료가이유도B16세포조망,환가유도B16세포발생자체탄서병도치자서성사망.
Objective To analyze the autophagy of mouse melanoma B16 cells induced by TNF-ct.Methods Mouse melanoma B 16 cells treated with TNF-α were used in this study.The expression levels of LC3- Ⅱand Beclinl were measured by western blot and mRNA levels of autophagy related gene atg5,atg7 and atgl2 were measured by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) after TNF-α treatment.Results The viability of B16 cells were obviously inhibited after incubation with TNF-α.The expression levels of autophagy related protein LC3- Ⅱ and Beclinl were elevated in TNF-α treated B16 cells compared with in control B16 cells.The mRNA expression levels of autophagy related gene Atg5,atg7 and atg12 showed consistent up regulation in TNF-a treated B16 cells compared with in control B16 cells.Conclusion TNF-α can induce autophagic cell death in B16 cells.
