病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2003年
3期
224-229
,共6页
徐丽宏%梁国栋%付士红%宋宏%王大维%苏乃伦%夏国良%张智清
徐麗宏%樑國棟%付士紅%宋宏%王大維%囌迺倫%夏國良%張智清
서려굉%량국동%부사홍%송굉%왕대유%소내륜%하국량%장지청
乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因%adw2亚型%Pichia Pastoris酵母表达系统%分泌型表达
乙型肝炎病毒錶麵抗原preS2+S基因%adw2亞型%Pichia Pastoris酵母錶達繫統%分泌型錶達
을형간염병독표면항원preS2+S기인%adw2아형%Pichia Pastoris효모표체계통%분비형표체
拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达.实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G418筛选多拷贝整合克隆,经甲醇诱导表达并用SDS-PAGE电泳及酶免疫法检测表达产物.经100个克隆筛选获得了表达量较高的表达菌株WC4.该菌株甲醇诱导后细胞上清10倍浓缩SDS-PAGE电泳检测显示,细胞上清中有特异蛋白条带,且第6天表达量最高,表达产物单体分子量为31kD左右.用美国雅培公司AUZYME MONOCLONAL试剂盒估算表达量为2μg/100 OD600细胞.上述结果表明,乙肝病毒表面抗原preS2+S基因在本系统中获得了分泌表达.同时检测了酵母细胞裂解液中特异蛋白质的表达,结果发现,自甲醇诱导后第一天即可检测到表达产物,而且除了第6天细胞外表达量高于细胞内外,其余各天的表达水平均表现为细胞内高于细胞外.以上结果提示,利用分泌型酵母表达系统表达乙肝病毒表面抗原在技术上可行,但表达产量偏低,一些蛋白滞留在细胞内未能分泌到培养基中.
擬穫得adw2亞型乙型肝炎(乙肝)病毒錶麵抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母分泌型錶達繫統(pPIC9K)的高效錶達.實驗首先將adw2亞型乙肝病毒錶麵抗原preS2+S基因重組到分泌型酵母錶達載體(pPIC9K)形成錶達質粒,電轉化酵母細胞KM71,G418篩選多拷貝整閤剋隆,經甲醇誘導錶達併用SDS-PAGE電泳及酶免疫法檢測錶達產物.經100箇剋隆篩選穫得瞭錶達量較高的錶達菌株WC4.該菌株甲醇誘導後細胞上清10倍濃縮SDS-PAGE電泳檢測顯示,細胞上清中有特異蛋白條帶,且第6天錶達量最高,錶達產物單體分子量為31kD左右.用美國雅培公司AUZYME MONOCLONAL試劑盒估算錶達量為2μg/100 OD600細胞.上述結果錶明,乙肝病毒錶麵抗原preS2+S基因在本繫統中穫得瞭分泌錶達.同時檢測瞭酵母細胞裂解液中特異蛋白質的錶達,結果髮現,自甲醇誘導後第一天即可檢測到錶達產物,而且除瞭第6天細胞外錶達量高于細胞內外,其餘各天的錶達水平均錶現為細胞內高于細胞外.以上結果提示,利用分泌型酵母錶達繫統錶達乙肝病毒錶麵抗原在技術上可行,但錶達產量偏低,一些蛋白滯留在細胞內未能分泌到培養基中.
의획득adw2아형을형간염(을간)병독표면항원preS2+S기인재Pichia Pastoris효모분비형표체계통(pPIC9K)적고효표체.실험수선장adw2아형을간병독표면항원preS2+S기인중조도분비형효모표체재체(pPIC9K)형성표체질립,전전화효모세포KM71,G418사선다고패정합극륭,경갑순유도표체병용SDS-PAGE전영급매면역법검측표체산물.경100개극륭사선획득료표체량교고적표체균주WC4.해균주갑순유도후세포상청10배농축SDS-PAGE전영검측현시,세포상청중유특이단백조대,차제6천표체량최고,표체산물단체분자량위31kD좌우.용미국아배공사AUZYME MONOCLONAL시제합고산표체량위2μg/100 OD600세포.상술결과표명,을간병독표면항원preS2+S기인재본계통중획득료분비표체.동시검측료효모세포렬해액중특이단백질적표체,결과발현,자갑순유도후제일천즉가검측도표체산물,이차제료제6천세포외표체량고우세포내외,기여각천적표체수평균표현위세포내고우세포외.이상결과제시,이용분비형효모표체계통표체을간병독표면항원재기술상가행,단표체산량편저,일사단백체류재세포내미능분비도배양기중.
