安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2006年
5期
491-493
,共3页
罗欣%徐从贞%方敏%张胜权
囉訢%徐從貞%方敏%張勝權
라흔%서종정%방민%장성권
白细胞介素15/遗传学%大肠杆菌/遗传学%基因表达%重组融合蛋白质类
白細胞介素15/遺傳學%大腸桿菌/遺傳學%基因錶達%重組融閤蛋白質類
백세포개소15/유전학%대장간균/유전학%기인표체%중조융합단백질류
目的 克隆人白细胞介素(IL)15全长cDNA,并在大肠杆菌中表达.方法 从人外周血分离的淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出hIL-15全长cDNA.构建到原核表达载体pET28a(+)中,通过卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,扩增后IPTG诱导表达.通过SDS-PAEG及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白.结果 成功构建人IL-15表达载体,并表达于大肠杆菌中.SDS-PAEG及Western-blot分析显示表达的融合蛋白分子量为16.1 ku,与理论值相符.结论 获得了hIL-15融合蛋白,为hIL-15单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础.
目的 剋隆人白細胞介素(IL)15全長cDNA,併在大腸桿菌中錶達.方法 從人外週血分離的淋巴細胞中提取總RNA,通過RT-PCR擴增齣hIL-15全長cDNA.構建到原覈錶達載體pET28a(+)中,通過卡那黴素平闆篩選及PCR鑒定,挑齣暘性剋隆進行擴增,DNA測序正確後,轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中,擴增後IPTG誘導錶達.通過SDS-PAEG及Western-blot方法鑒定錶達的融閤蛋白.結果 成功構建人IL-15錶達載體,併錶達于大腸桿菌中.SDS-PAEG及Western-blot分析顯示錶達的融閤蛋白分子量為16.1 ku,與理論值相符.結論 穫得瞭hIL-15融閤蛋白,為hIL-15單剋隆抗體的製備及其功能研究奠定瞭基礎.
목적 극륭인백세포개소(IL)15전장cDNA,병재대장간균중표체.방법 종인외주혈분리적림파세포중제취총RNA,통과RT-PCR확증출hIL-15전장cDNA.구건도원핵표체재체pET28a(+)중,통과잡나매소평판사선급PCR감정,도출양성극륭진행확증,DNA측서정학후,전화도대장간균BL21(DE3)중,확증후IPTG유도표체.통과SDS-PAEG급Western-blot방법감정표체적융합단백.결과 성공구건인IL-15표체재체,병표체우대장간균중.SDS-PAEG급Western-blot분석현시표체적융합단백분자량위16.1 ku,여이론치상부.결론 획득료hIL-15융합단백,위hIL-15단극륭항체적제비급기공능연구전정료기출.
