华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
2期
80-84,92
,共6页
林文耀%樊惠英%程晓亮%陈筱薇%叶煜%廖明
林文耀%樊惠英%程曉亮%陳篠薇%葉煜%廖明
림문요%번혜영%정효량%진소미%협욱%료명
禽流感病毒%H9N2亚型%双表达%HA基因%重组假型杆状病毒
禽流感病毒%H9N2亞型%雙錶達%HA基因%重組假型桿狀病毒
금류감병독%H9N2아형%쌍표체%HA기인%중조가형간상병독
以含有H9N2禽流感病毒HA基因的重组质粒pMD18-H9HA为模板,扩增HA基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将含有H9HA及gp64的基因片段克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA-H9-HA.然后将含有CMV启动子、H9HA及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-G,得到重组质粒pFastBac-G-H9-HA.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭载体Bacmid-G-H9-HA.利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-Dual-H9-HA.间接免疫荧光实验表明,该重组杆状病毒可以转导哺乳动物细胞并表达HA蛋白.免疫电镜观察结果表明,HA蛋白可以在该重组杆状病毒表面展示.
以含有H9N2禽流感病毒HA基因的重組質粒pMD18-H9HA為模闆,擴增HA基因,將其亞剋隆入桿狀病毒錶麵展示質粒pBACsurf-1中,再次將含有H9HA及gp64的基因片段剋隆到質粒pcDNA3.1(+),穫得重組質粒pcDNA-H9-HA.然後將含有CMV啟動子、H9HA及gp64的基因片段剋隆到桿狀病毒轉移質粒pFastBac-G,得到重組質粒pFastBac-G-H9-HA.將該重組質粒轉化到DH10Bac感受態細胞中,得到重組穿梭載體Bacmid-G-H9-HA.利用脂質體轉染Sf9昆蟲細胞,穫得重組桿狀病毒BV-Dual-H9-HA.間接免疫熒光實驗錶明,該重組桿狀病毒可以轉導哺乳動物細胞併錶達HA蛋白.免疫電鏡觀察結果錶明,HA蛋白可以在該重組桿狀病毒錶麵展示.
이함유H9N2금류감병독HA기인적중조질립pMD18-H9HA위모판,확증HA기인,장기아극륭입간상병독표면전시질립pBACsurf-1중,재차장함유H9HA급gp64적기인편단극륭도질립pcDNA3.1(+),획득중조질립pcDNA-H9-HA.연후장함유CMV계동자、H9HA급gp64적기인편단극륭도간상병독전이질립pFastBac-G,득도중조질립pFastBac-G-H9-HA.장해중조질립전화도DH10Bac감수태세포중,득도중조천사재체Bacmid-G-H9-HA.이용지질체전염Sf9곤충세포,획득중조간상병독BV-Dual-H9-HA.간접면역형광실험표명,해중조간상병독가이전도포유동물세포병표체HA단백.면역전경관찰결과표명,HA단백가이재해중조간상병독표면전시.
