微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
2期
147-151
,共5页
面包酵母%基因敲除%铜抗性%pSH-CUP重组质粒构建%酸性海藻糖酶
麵包酵母%基因敲除%銅抗性%pSH-CUP重組質粒構建%痠性海藻糖酶
면포효모%기인고제%동항성%pSH-CUP중조질립구건%산성해조당매
设计含有与面包酵母(Saccharomyces cerevisiae BY-6)编码酸性海藻糖酶ATH基因内部部分序列同源的长引物,以质粒pUG6为模板进行PCR构建带有Cre/loxP系统的敲除单元,转化面包酵母获得G418阳性克隆.将铜抗性基因(cuP1-MT1)导入Cre重组酶表达质粒pSH47,得到重组质粒pSH-CUZ,并转化阳性克隆,以铜抗性筛选面包酵母转化子.半乳糖诱导表达Cre酶切除Kanr基因.重组质粒pSH-CUP的构建,不仅解决了酵母转化子筛选标记问题和非酵母基因的引入,而且使LoxP-kanMX-loxP基因敲除体系在进行真核生物基因敲除时更加方便可行.
設計含有與麵包酵母(Saccharomyces cerevisiae BY-6)編碼痠性海藻糖酶ATH基因內部部分序列同源的長引物,以質粒pUG6為模闆進行PCR構建帶有Cre/loxP繫統的敲除單元,轉化麵包酵母穫得G418暘性剋隆.將銅抗性基因(cuP1-MT1)導入Cre重組酶錶達質粒pSH47,得到重組質粒pSH-CUZ,併轉化暘性剋隆,以銅抗性篩選麵包酵母轉化子.半乳糖誘導錶達Cre酶切除Kanr基因.重組質粒pSH-CUP的構建,不僅解決瞭酵母轉化子篩選標記問題和非酵母基因的引入,而且使LoxP-kanMX-loxP基因敲除體繫在進行真覈生物基因敲除時更加方便可行.
설계함유여면포효모(Saccharomyces cerevisiae BY-6)편마산성해조당매ATH기인내부부분서렬동원적장인물,이질립pUG6위모판진행PCR구건대유Cre/loxP계통적고제단원,전화면포효모획득G418양성극륭.장동항성기인(cuP1-MT1)도입Cre중조매표체질립pSH47,득도중조질립pSH-CUZ,병전화양성극륭,이동항성사선면포효모전화자.반유당유도표체Cre매절제Kanr기인.중조질립pSH-CUP적구건,불부해결료효모전화자사선표기문제화비효모기인적인입,이차사LoxP-kanMX-loxP기인고제체계재진행진핵생물기인고제시경가방편가행.
