中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2008年
12期
2301-2304
,共4页
骨髓间充质干细胞%心肌细胞裂解液%低氧%受体,肾上腺素能β%环磷酸腺苷
骨髓間充質榦細胞%心肌細胞裂解液%低氧%受體,腎上腺素能β%環燐痠腺苷
골수간충질간세포%심기세포렬해액%저양%수체,신상선소능β%배린산선감
目的:目前公认肾上腺素能β1受体含量和环磷酸腺苷水平在心肌细胞处于低氧状态时会发生改变,然而诱导分化的骨髓间充质干细胞经慢性低氧作用后能否表现与心肌细胞相同的特性还未知,故检测其β1受体mRNA表达及第二信使环磷酸腺苷活性变化.方法:实验于2006-02/2007-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院心研所实验室完成.①动物:清洁级成年昆明小鼠10只,新生1 d龄昆明小鼠40只,均购自华中科技大学同济医学院实验动物中心,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:成年小鼠麻醉后于肱骨及胫骨骨折处吸取适量骨髓,加入含15%胎牛血清、100 U/mL青霉素G、80 U/mL链霉素的IMDM培养基,贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞.将新生鼠处死迅速取心脏,用Ⅱ型胶原酶消化离心,将生长较好的第1、2代心肌细胞制成1×109 L-1细胞裂解液,体外模拟心肌微环境诱导分化骨髓间充质干细胞.设立2组,空白对照组仅加入IMDM培养基,实验组加入IMDM培养基和心肌细胞裂解液,隔天换液.继续培养1周后又分为4个亚组:常氧组,常氧不加药物作用72 h;低氧组,用1%氧浓度作用72 h;异丙肾上腺素组,用1×10-5mmol/L异丙肾上腺素作用72 h;低氧+异丙肾上腺素组,用1%低氧和1×10-5mmol/L异丙肾上腺素联合作用72 h.⑨实验评估:RT-PCR法检测骨髓间充质干细胞β-受体mRNA水平,放射免疫法测定骨髓间充质干细胞环磷酸腺苷的活性.结果:①骨髓间充质干细胞β1受体mRNA水平的表达:空白对照组不表达β1受体mRNA.作用72h后,常氧组表达β1受体mRNA,低氧组β1受体mRNA水平升高100%,异丙肾上腺素组、低氧+异丙肾上腺素组β1受体mRNA水平均降低40%.②骨髓间充质干细胞环磷酸腺苷活件检测:与常氧组比较,低氧组环磷酸腺苷活性无明显变化(P＞0.05);异丙肾上腺素组环磷酸腺苷活性下降35%(P＜0.05);低氧+异丙肾上腺素组与异丙肾上腺素组水平相当(P＞0.05).结论:①采用心肌细胞裂解液体外模拟心肌微环境诱导分化的骨髓间充质干细胞表达β1受体.②单纯低氧作用可明显升高骨髓间充质干细胞β1受体mRNA水平,环磷酸腺苷活性无变化.经异丙肾上腺素作用后,低氧环境无法显著改变β1受体mRNA水平和环磷酸腺苷活性.
目的:目前公認腎上腺素能β1受體含量和環燐痠腺苷水平在心肌細胞處于低氧狀態時會髮生改變,然而誘導分化的骨髓間充質榦細胞經慢性低氧作用後能否錶現與心肌細胞相同的特性還未知,故檢測其β1受體mRNA錶達及第二信使環燐痠腺苷活性變化.方法:實驗于2006-02/2007-04在華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院心研所實驗室完成.①動物:清潔級成年昆明小鼠10隻,新生1 d齡昆明小鼠40隻,均購自華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心,實驗過程中對動物的處置符閤動物倫理學標準.②實驗方法:成年小鼠痳醉後于肱骨及脛骨骨摺處吸取適量骨髓,加入含15%胎牛血清、100 U/mL青黴素G、80 U/mL鏈黴素的IMDM培養基,貼壁法分離培養骨髓間充質榦細胞.將新生鼠處死迅速取心髒,用Ⅱ型膠原酶消化離心,將生長較好的第1、2代心肌細胞製成1×109 L-1細胞裂解液,體外模擬心肌微環境誘導分化骨髓間充質榦細胞.設立2組,空白對照組僅加入IMDM培養基,實驗組加入IMDM培養基和心肌細胞裂解液,隔天換液.繼續培養1週後又分為4箇亞組:常氧組,常氧不加藥物作用72 h;低氧組,用1%氧濃度作用72 h;異丙腎上腺素組,用1×10-5mmol/L異丙腎上腺素作用72 h;低氧+異丙腎上腺素組,用1%低氧和1×10-5mmol/L異丙腎上腺素聯閤作用72 h.⑨實驗評估:RT-PCR法檢測骨髓間充質榦細胞β-受體mRNA水平,放射免疫法測定骨髓間充質榦細胞環燐痠腺苷的活性.結果:①骨髓間充質榦細胞β1受體mRNA水平的錶達:空白對照組不錶達β1受體mRNA.作用72h後,常氧組錶達β1受體mRNA,低氧組β1受體mRNA水平升高100%,異丙腎上腺素組、低氧+異丙腎上腺素組β1受體mRNA水平均降低40%.②骨髓間充質榦細胞環燐痠腺苷活件檢測:與常氧組比較,低氧組環燐痠腺苷活性無明顯變化(P＞0.05);異丙腎上腺素組環燐痠腺苷活性下降35%(P＜0.05);低氧+異丙腎上腺素組與異丙腎上腺素組水平相噹(P＞0.05).結論:①採用心肌細胞裂解液體外模擬心肌微環境誘導分化的骨髓間充質榦細胞錶達β1受體.②單純低氧作用可明顯升高骨髓間充質榦細胞β1受體mRNA水平,環燐痠腺苷活性無變化.經異丙腎上腺素作用後,低氧環境無法顯著改變β1受體mRNA水平和環燐痠腺苷活性.
목적:목전공인신상선소능β1수체함량화배린산선감수평재심기세포처우저양상태시회발생개변,연이유도분화적골수간충질간세포경만성저양작용후능부표현여심기세포상동적특성환미지,고검측기β1수체mRNA표체급제이신사배린산선감활성변화.방법:실험우2006-02/2007-04재화중과기대학동제의학원부속협화의원심연소실험실완성.①동물:청길급성년곤명소서10지,신생1 d령곤명소서40지,균구자화중과기대학동제의학원실험동물중심,실험과정중대동물적처치부합동물윤리학표준.②실험방법:성년소서마취후우굉골급경골골절처흡취괄량골수,가입함15%태우혈청、100 U/mL청매소G、80 U/mL련매소적IMDM배양기,첩벽법분리배양골수간충질간세포.장신생서처사신속취심장,용Ⅱ형효원매소화리심,장생장교호적제1、2대심기세포제성1×109 L-1세포렬해액,체외모의심기미배경유도분화골수간충질간세포.설립2조,공백대조조부가입IMDM배양기,실험조가입IMDM배양기화심기세포렬해액,격천환액.계속배양1주후우분위4개아조:상양조,상양불가약물작용72 h;저양조,용1%양농도작용72 h;이병신상선소조,용1×10-5mmol/L이병신상선소작용72 h;저양+이병신상선소조,용1%저양화1×10-5mmol/L이병신상선소연합작용72 h.⑨실험평고:RT-PCR법검측골수간충질간세포β-수체mRNA수평,방사면역법측정골수간충질간세포배린산선감적활성.결과:①골수간충질간세포β1수체mRNA수평적표체:공백대조조불표체β1수체mRNA.작용72h후,상양조표체β1수체mRNA,저양조β1수체mRNA수평승고100%,이병신상선소조、저양+이병신상선소조β1수체mRNA수평균강저40%.②골수간충질간세포배린산선감활건검측:여상양조비교,저양조배린산선감활성무명현변화(P＞0.05);이병신상선소조배린산선감활성하강35%(P＜0.05);저양+이병신상선소조여이병신상선소조수평상당(P＞0.05).결론:①채용심기세포렬해액체외모의심기미배경유도분화적골수간충질간세포표체β1수체.②단순저양작용가명현승고골수간충질간세포β1수체mRNA수평,배린산선감활성무변화.경이병신상선소작용후,저양배경무법현저개변β1수체mRNA수평화배린산선감활성.
