CAJ | 학술논문

背景:小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层能有效促进胚胎干细胞及诱导多能性干细胞增殖并维持其未分化特性和多潜能性,且效果优于无饲养层单独添加一些细胞因子,而且可以为上述两种细胞提供类似的胚胎发育环境.目的:建立稳定高效的ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养体系,用于培养人胚胎干细胞及诱导多能性干细胞.方法:使用胰蛋白酶消化法分离ICR小鼠胚胎成纤维细胞,观察不同的胰蛋白酶水平及消化时间对获取小鼠胚胎成纤维细胞的量及其增殖活性的影响;利用不同质量浓度丝裂霉素C处理小鼠胚胎成纤维细胞1,1.5,2,2.5,3,3.5 h制备饲养层细胞,MTT法检测其增殖活性,探索其制备饲养层的最佳条件.结果与结论:分离ICR小鼠胚胎原代成纤维细胞最佳胰蛋白酶浓度为0.05%,消化时间为12～15 min,丝裂酶素最佳作用质量浓度和时间为10 mg/L作用2.5 h,成纤维细胞饲养层可以维持8～12 d.0.05%胰蛋白酶消化15～20 min效果优于0.15%,0.25%胰蛋白酶消化;10 mg/L丝裂霉素C处理胚胎成纤维细胞2.5 h能有效抑制其增殖,表明该条件下的饲养层细胞能很好的支持胚胎干细胞及诱导多能性干细胞生长.
배경:소서배태성섬유세포작위사양층능유효촉진배태간세포급유도다능성간세포증식병유지기미분화특성화다잠능성,차효과우우무사양층단독첨가일사세포인자,이차가이위상술량충세포제공유사적배태발육배경.목적:건립은정고효적ICR소서배태성섬유세포사양층배양체계,용우배양인배태간세포급유도다능성간세포.방법:사용이단백매소화법분리ICR소서배태성섬유세포,관찰불동적이단백매수평급소화시간대획취소서배태성섬유세포적량급기증식활성적영향;이용불동질량농도사렬매소C처리소서배태성섬유세포1,1.5,2,2.5,3,3.5 h제비사양층세포,MTT법검측기증식활성,탐색기제비사양층적최가조건.결과여결론:분리ICR소서배태원대성섬유세포최가이단백매농도위0.05%,소화시간위12～15 min,사렬매소최가작용질량농도화시간위10 mg/L작용2.5 h,성섬유세포사양층가이유지8～12 d.0.05%이단백매소화15～20 min효과우우0.15%,0.25%이단백매소화;10 mg/L사렬매소C처리배태성섬유세포2.5 h능유효억제기증식,표명해조건하적사양층세포능흔호적지지배태간세포급유도다능성간세포생장.