湖南农业大学学报（自然科学版）
湖南農業大學學報（自然科學版）
호남농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HUNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2010年
4期
381-384,429
,共5页
水稻%L-半乳糖内酯脱氢酶%原核表达%抗体
水稻%L-半乳糖內酯脫氫酶%原覈錶達%抗體
수도%L-반유당내지탈경매%원핵표체%항체
应用RT-PCR技术从水稻叶片中克隆了水稻L-半乳糖内酯脱氢酶(GLDH)的全长基因.序列分析表明,水稻GLDH基因全长1 752 bp,亚克隆其部分成熟蛋白编码基因(789 bp),利用基因重组技术构建了E.coli/ pET30a-GLDHe,经酶切鉴定,DNA测序,证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析证实表达出相对分子质量约为36 000的蛋白.用原核表达蛋白作为抗原免疫家兔制备抗体,用Western blot检测抗体的特异性及效价,结果表明,抗体血清效价为1∶1 000,在加IPTG诱导后的菌液中可以检测到相应的蛋白条带((相对分子质量为36 000)),在水稻叶片样品中能检测到1条相对分子质量为36 000的蛋白条带.
應用RT-PCR技術從水稻葉片中剋隆瞭水稻L-半乳糖內酯脫氫酶(GLDH)的全長基因.序列分析錶明,水稻GLDH基因全長1 752 bp,亞剋隆其部分成熟蛋白編碼基因(789 bp),利用基因重組技術構建瞭E.coli/ pET30a-GLDHe,經酶切鑒定,DNA測序,證實重組質粒構建正確;將重組質粒轉化大腸桿菌Rosseta,IPTG誘導錶達,SDS-PAGE分析證實錶達齣相對分子質量約為36 000的蛋白.用原覈錶達蛋白作為抗原免疫傢兔製備抗體,用Western blot檢測抗體的特異性及效價,結果錶明,抗體血清效價為1∶1 000,在加IPTG誘導後的菌液中可以檢測到相應的蛋白條帶((相對分子質量為36 000)),在水稻葉片樣品中能檢測到1條相對分子質量為36 000的蛋白條帶.
응용RT-PCR기술종수도협편중극륭료수도L-반유당내지탈경매(GLDH)적전장기인.서렬분석표명,수도GLDH기인전장1 752 bp,아극륭기부분성숙단백편마기인(789 bp),이용기인중조기술구건료E.coli/ pET30a-GLDHe,경매절감정,DNA측서,증실중조질립구건정학;장중조질립전화대장간균Rosseta,IPTG유도표체,SDS-PAGE분석증실표체출상대분자질량약위36 000적단백.용원핵표체단백작위항원면역가토제비항체,용Western blot검측항체적특이성급효개,결과표명,항체혈청효개위1∶1 000,재가IPTG유도후적균액중가이검측도상응적단백조대((상대분자질량위36 000)),재수도협편양품중능검측도1조상대분자질량위36 000적단백조대.
