中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2010年
10期
1521-1524
,共4页
范丽梅%宋杰%崔松花%崔满华%张丽波
範麗梅%宋傑%崔鬆花%崔滿華%張麗波
범려매%송걸%최송화%최만화%장려파
卵巢癌%葡萄糖调节蛋白78%顺铂%耐药
卵巢癌%葡萄糖調節蛋白78%順鉑%耐藥
란소암%포도당조절단백78%순박%내약
目的 探讨以葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因为靶向的RNA干扰(RNAi)抑制GRP78基因的表达,对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的影响.方法 以GRP78基因为靶向的pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒的构建,脂质法转染至细胞中;RT-PCR及Western blot方法检测GRP78 mRNA及蛋白表达;Western blot方法检测CHOP蛋白表达;MTT法检测不同浓度顺铂作用下细胞存活率,计算IC50及耐药指数.结果 RT-PCR及Western blot检测转染GRP78 siRNA重组质粒24 h、48 h、72 h 均能明显抑制SKOV3/DDP细胞GRP78基因表达,其中48h抑制效果最为明显;抑制SKOV3/DDP细胞GRP78基因表达能上调CHOP蛋白表达;顺铂作用24h,SKOV3/DDP细胞的IC50(26.13 μg/ml)是其亲本SKOV3细胞IC50(8.25 μg/ml)的3.1倍;转染pSH1Si-GRP78重组质粒后SKOV3/DDP细胞IC50(11.62 μg/ml)明显降低.结论 转染GRP78 siRNA重组质粒有效抑制SKOV3/DDP细胞GRP78基因表达;抑制GRP78基因表达能逆转SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药性.
目的 探討以葡萄糖調節蛋白78(GRP78)基因為靶嚮的RNA榦擾(RNAi)抑製GRP78基因的錶達,對人卵巢癌順鉑耐藥細胞株SKOV3/DDP的影響.方法 以GRP78基因為靶嚮的pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重組質粒的構建,脂質法轉染至細胞中;RT-PCR及Western blot方法檢測GRP78 mRNA及蛋白錶達;Western blot方法檢測CHOP蛋白錶達;MTT法檢測不同濃度順鉑作用下細胞存活率,計算IC50及耐藥指數.結果 RT-PCR及Western blot檢測轉染GRP78 siRNA重組質粒24 h、48 h、72 h 均能明顯抑製SKOV3/DDP細胞GRP78基因錶達,其中48h抑製效果最為明顯;抑製SKOV3/DDP細胞GRP78基因錶達能上調CHOP蛋白錶達;順鉑作用24h,SKOV3/DDP細胞的IC50(26.13 μg/ml)是其親本SKOV3細胞IC50(8.25 μg/ml)的3.1倍;轉染pSH1Si-GRP78重組質粒後SKOV3/DDP細胞IC50(11.62 μg/ml)明顯降低.結論 轉染GRP78 siRNA重組質粒有效抑製SKOV3/DDP細胞GRP78基因錶達;抑製GRP78基因錶達能逆轉SKOV3/DDP細胞的順鉑耐藥性.
목적 탐토이포도당조절단백78(GRP78)기인위파향적RNA간우(RNAi)억제GRP78기인적표체,대인란소암순박내약세포주SKOV3/DDP적영향.방법 이GRP78기인위파향적pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA중조질립적구건,지질법전염지세포중;RT-PCR급Western blot방법검측GRP78 mRNA급단백표체;Western blot방법검측CHOP단백표체;MTT법검측불동농도순박작용하세포존활솔,계산IC50급내약지수.결과 RT-PCR급Western blot검측전염GRP78 siRNA중조질립24 h、48 h、72 h 균능명현억제SKOV3/DDP세포GRP78기인표체,기중48h억제효과최위명현;억제SKOV3/DDP세포GRP78기인표체능상조CHOP단백표체;순박작용24h,SKOV3/DDP세포적IC50(26.13 μg/ml)시기친본SKOV3세포IC50(8.25 μg/ml)적3.1배;전염pSH1Si-GRP78중조질립후SKOV3/DDP세포IC50(11.62 μg/ml)명현강저.결론 전염GRP78 siRNA중조질립유효억제SKOV3/DDP세포GRP78기인표체;억제GRP78기인표체능역전SKOV3/DDP세포적순박내약성.
