中华耳科学杂志
中華耳科學雜誌
중화이과학잡지
CHINESE JOURNAL OF OTOLOGY
2010年
4期
466-469
,共4页
郭维维%杨卫平%马龙%许阳%胡博华
郭維維%楊衛平%馬龍%許暘%鬍博華
곽유유%양위평%마룡%허양%호박화
MCL1基因(髓样细胞白血病-1基因)%质粒%基因治疗
MCL1基因(髓樣細胞白血病-1基因)%質粒%基因治療
MCL1기인(수양세포백혈병-1기인)%질립%기인치료
目的 构建含有人髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCLl)和绿色荧光蛋白基因(pEGFP)的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础.方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒.经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)检测MCL1 mRNA的表达,Western Blot(蛋白质印迹)方法 检测MCL1蛋白的表达.结果 阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果 与GenBank中MCL1序列相同.重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,Western Blot检测出40kDa大小的蛋白.结论 成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达.
目的 構建含有人髓細胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCLl)和綠色熒光蛋白基因(pEGFP)的真覈共錶達載體,為聾病的基因治療奠定實驗基礎.方法 應用基因重組技術和限製性內切酶酶切,及基因測序方法,構建併鑒定pEGFP-MCL1真覈錶達質粒.經脂質體介導轉染293細胞繫,熒光顯微鏡下觀察pEGFP-MCL1真覈錶達質粒在293細胞繫中的錶達,利用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(Reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)檢測MCL1 mRNA的錶達,Western Blot(蛋白質印跡)方法 檢測MCL1蛋白的錶達.結果 暘性重組子經酶切鑒定含有MCL1基因片段,基因測序結果 與GenBank中MCL1序列相同.重組pEGFP-MCL1真覈錶達質粒轉入293細胞繫後24小時,熒光顯微鏡下可見綠色熒光錶達,RT-PCR能夠擴增齣MCL1的條帶,Western Blot檢測齣40kDa大小的蛋白.結論 成功地構建瞭含有人全長MCL1基因和pEGFP基因的真覈共錶達載體,且能在哺乳動物293細胞繫中錶達.
목적 구건함유인수세포백혈병기인-1(myeloid cell leukemia-1,MCLl)화록색형광단백기인(pEGFP)적진핵공표체재체,위롱병적기인치료전정실험기출.방법 응용기인중조기술화한제성내절매매절,급기인측서방법,구건병감정pEGFP-MCL1진핵표체질립.경지질체개도전염293세포계,형광현미경하관찰pEGFP-MCL1진핵표체질립재293세포계중적표체,이용역전록-취합매련반응(Reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)검측MCL1 mRNA적표체,Western Blot(단백질인적)방법 검측MCL1단백적표체.결과 양성중조자경매절감정함유MCL1기인편단,기인측서결과 여GenBank중MCL1서렬상동.중조pEGFP-MCL1진핵표체질립전입293세포계후24소시,형광현미경하가견록색형광표체,RT-PCR능구확증출MCL1적조대,Western Blot검측출40kDa대소적단백.결론 성공지구건료함유인전장MCL1기인화pEGFP기인적진핵공표체재체,차능재포유동물293세포계중표체.
