中国农业科技导报
中國農業科技導報
중국농업과기도보
REVIEW OF CHINA AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY
2012年
1期
91-97
,共7页
刘树鹏%李刚强%王楠%刘德虎
劉樹鵬%李剛彊%王楠%劉德虎
류수붕%리강강%왕남%류덕호
CP4-EPSPS%蛋白表达%蛋白纯化%酶联检测
CP4-EPSPS%蛋白錶達%蛋白純化%酶聯檢測
CP4-EPSPS%단백표체%단백순화%매련검측
构建了一个含有CP4-EPSPS外源基因的细菌表达载体并在大肠杆菌Transtta菌株中的高效表达,通过SDS-PAGE检测发现,目标蛋白完全以可溶性方式存在于细胞破碎上清液中,且约占到细菌可溶性蛋白的40％左右.收集该上清液并进而通过连续2次镍柱亲和层析,CP4-EPSPS重组蛋白纯度可达99.9％以上,对其进行N端序列分析,与预期的结果完全一致.以其作为标准品,通过ELISA,成功检测出三株CP4-EPSPS转基因烟草中目标蛋白含量分别为0.292 μg/g、0.477 μg/g和0.703 μg/g.该蛋白表达和纯化体系可为CP4-EPSPS转基因植物蛋白量值溯源传递的标准物质研制提供稳定物质基础.
構建瞭一箇含有CP4-EPSPS外源基因的細菌錶達載體併在大腸桿菌Transtta菌株中的高效錶達,通過SDS-PAGE檢測髮現,目標蛋白完全以可溶性方式存在于細胞破碎上清液中,且約佔到細菌可溶性蛋白的40％左右.收集該上清液併進而通過連續2次鎳柱親和層析,CP4-EPSPS重組蛋白純度可達99.9％以上,對其進行N耑序列分析,與預期的結果完全一緻.以其作為標準品,通過ELISA,成功檢測齣三株CP4-EPSPS轉基因煙草中目標蛋白含量分彆為0.292 μg/g、0.477 μg/g和0.703 μg/g.該蛋白錶達和純化體繫可為CP4-EPSPS轉基因植物蛋白量值溯源傳遞的標準物質研製提供穩定物質基礎.
구건료일개함유CP4-EPSPS외원기인적세균표체재체병재대장간균Transtta균주중적고효표체,통과SDS-PAGE검측발현,목표단백완전이가용성방식존재우세포파쇄상청액중,차약점도세균가용성단백적40％좌우.수집해상청액병진이통과련속2차얼주친화층석,CP4-EPSPS중조단백순도가체99.9％이상,대기진행N단서렬분석,여예기적결과완전일치.이기작위표준품,통과ELISA,성공검측출삼주CP4-EPSPS전기인연초중목표단백함량분별위0.292 μg/g、0.477 μg/g화0.703 μg/g.해단백표체화순화체계가위CP4-EPSPS전기인식물단백량치소원전체적표준물질연제제공은정물질기출.
