CAJ | 학술논문

目的构建能表达L1E7融合蛋白的原核表达菌株,纯化蛋白,并观察其免疫效果.方法用PCR方法分别扩增出C末端部分缺失的HPV16 L1基因和HPV16 E7编码基因N端部分序列.将上述基因连接,构建融合基因L1△CE7N并将其插到原核表达载体pGEX-2T中进行融合蛋白表达纯化,然后观察其免疫效果.结果L1△CE7N融合基因测序结果表明,序列与设计相符,读码框架正确.将其插入原核表达质粒在大肠埃希菌中获得高效表达;经Wester-Blot鉴定在相对分子质量约85×103处有特异性表达带,与预期相符.用亲和层析和分子筛可纯化L1△CE7N融合蛋白,将其免疫C57BL/6小鼠,结果表明融合蛋白能诱发高滴度L1、E7抗体,并能保护小鼠免受TC-1肿瘤细胞的攻击.结论本实验在原核系统中高效表达并纯化了L1△CE7N融合蛋白,该蛋白可作为预防和治疗HPV16感染以及相关肿瘤的候选疫苗株.为研制HPV16预防治疗性疫苗探索一条经济、易普及的途径.
목적구건능표체L1E7융합단백적원핵표체균주,순화단백,병관찰기면역효과.방법용PCR방법분별확증출C말단부분결실적HPV16 L1기인화HPV16 E7편마기인N단부분서렬.장상술기인련접,구건융합기인L1△CE7N병장기삽도원핵표체재체pGEX-2T중진행융합단백표체순화,연후관찰기면역효과.결과L1△CE7N융합기인측서결과표명,서렬여설계상부,독마광가정학.장기삽입원핵표체질립재대장애희균중획득고효표체;경Wester-Blot감정재상대분자질량약85×103처유특이성표체대,여예기상부.용친화층석화분자사가순화L1△CE7N융합단백,장기면역C57BL/6소서,결과표명융합단백능유발고적도L1、E7항체,병능보호소서면수TC-1종류세포적공격.결론본실험재원핵계통중고효표체병순화료L1△CE7N융합단백,해단백가작위예방화치료HPV16감염이급상관종류적후선역묘주.위연제HPV16예방치료성역묘탐색일조경제、역보급적도경.