华中科技大学学报(自然科学版)
華中科技大學學報(自然科學版)
화중과기대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF HUAZHONG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2002年
8期
110-113
,共4页
邓明刚%王菲%周明%赵开弘
鄧明剛%王菲%週明%趙開弘
산명강%왕비%주명%조개홍
藻红蓝蛋白α亚基%分子设计%重组%层理鞭枝藻%连接/异构酶
藻紅藍蛋白α亞基%分子設計%重組%層理鞭枝藻%連接/異構酶
조홍람단백α아기%분자설계%중조%층리편지조%련접/이구매
从层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基基因表达质粒pGEMD-pecA出发,通过酶切、削平或补齐粘末端及重新环合等技术,使其后的阅读框发生移码突变,从而得到C-端缺失24个和36个氨基酸的两个缺失突变体pGEMD-pecA-C24和pGEMD-pecA-C36.用PCR技术将已突变的基因片段转入表达载体pET30中,得到pET30-pecA-C24和pET30-pecA-C36,获得高效表达.利用PCR技术从pGEMD-pecA中扩增出N-端缺失20个和32个氨基酸pecA的突变基因片段,并克隆于表达载体pET30中,得到pET30-pecA-N20和pET30-pecA-N32,获得高效表达.两个C-端缺失突变的脱辅基蛋白无论有或无藻红蓝蛋白连接/异构酶催化,均不能与藻蓝胆素共价偶联.两个N-端缺失突变脱辅基蛋白均能在藻红蓝蛋白连接/异构酶催化下与藻蓝胆素共价偶联,且色素从藻蓝胆素转化为藻紫胆素.
從層理鞭枝藻藻紅藍蛋白α亞基基因錶達質粒pGEMD-pecA齣髮,通過酶切、削平或補齊粘末耑及重新環閤等技術,使其後的閱讀框髮生移碼突變,從而得到C-耑缺失24箇和36箇氨基痠的兩箇缺失突變體pGEMD-pecA-C24和pGEMD-pecA-C36.用PCR技術將已突變的基因片段轉入錶達載體pET30中,得到pET30-pecA-C24和pET30-pecA-C36,穫得高效錶達.利用PCR技術從pGEMD-pecA中擴增齣N-耑缺失20箇和32箇氨基痠pecA的突變基因片段,併剋隆于錶達載體pET30中,得到pET30-pecA-N20和pET30-pecA-N32,穫得高效錶達.兩箇C-耑缺失突變的脫輔基蛋白無論有或無藻紅藍蛋白連接/異構酶催化,均不能與藻藍膽素共價偶聯.兩箇N-耑缺失突變脫輔基蛋白均能在藻紅藍蛋白連接/異構酶催化下與藻藍膽素共價偶聯,且色素從藻藍膽素轉化為藻紫膽素.
종층리편지조조홍람단백α아기기인표체질립pGEMD-pecA출발,통과매절、삭평혹보제점말단급중신배합등기술,사기후적열독광발생이마돌변,종이득도C-단결실24개화36개안기산적량개결실돌변체pGEMD-pecA-C24화pGEMD-pecA-C36.용PCR기술장이돌변적기인편단전입표체재체pET30중,득도pET30-pecA-C24화pET30-pecA-C36,획득고효표체.이용PCR기술종pGEMD-pecA중확증출N-단결실20개화32개안기산pecA적돌변기인편단,병극륭우표체재체pET30중,득도pET30-pecA-N20화pET30-pecA-N32,획득고효표체.량개C-단결실돌변적탈보기단백무론유혹무조홍람단백련접/이구매최화,균불능여조람담소공개우련.량개N-단결실돌변탈보기단백균능재조홍람단백련접/이구매최화하여조람담소공개우련,차색소종조람담소전화위조자담소.
