CAJ | 학술논문

目的:对国产荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测乙型肝炎病毒聚合酶酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸基序(HBV YMDD)变异的试剂进行临床应用评价.方法:慢性乙型肝炎患者外周血浆标本217份,分别采用荧光标记Taqman探针定量PCR法(FT-PCR)和荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测HBV DNA含量和YMDD及其变异;其中78份HBVDNA阳性标本采用基因型特异性多引物对巢式PCR法进行基因分型(A-F),30份标本用PCR产物克隆测序法检测HBV YMDD及其变异.结果:血浆标本HBV DNA阳性率(≥1.0×106copies/L)为75.6%(164/217).YMDD及其变异检出率为67.7%(147/217),其中YMDD 44.9%(66/147),YIDD 225%(33/147),YVDD 17.7%(26/147),YIDD/YVDD混合株10.9%(16/147),其他混合株4.0%(6/147);结合HBV DNA含量,HBV YMDD及其变异的检出下限为HBV DNA=5.0×106copies/L,但在106copies/L时检出率较低,仅为36.4%,随着HBV DNA含量增高,检出率显著增高(＞80%),且在107copies/L时即有显著增高(x2=7.177,P＜0.01).在基因分型的78份标本中,C基因型占89.8%,B和D基因型分别占8.9%和1.3%,YMDD及其变异总检出率为100%,变异总检出率为59.0%;1份D基因型YMDD及其变异检测为YIDD/YVDD混合变异;B,C两种基因型变异检出率分别为71.4%和55.7%,但二者无统计学差异.以测序法的检测结果为相对标准,则FH-PCR-MC法检测HBV YMDD及其变异的相对敏感性、特异性和符合率分别为96.3%(26/27),100%(3/3)和96.7%(29/30);对于HBV YMDD及其变异的类型,两种方法检测结果一致.结论:FH-PCR-MC法是一种快速、特异的HBVYMDD及其变异检测方法,具有较高的检出率,且能区分YMDD及其变异的类型.
목적:대국산형광표기잡교쌍탐침PCR융해곡선법(FH-PCR-MC)검측을형간염병독취합매락안산-단안산-천문동안산-천문동안산기서(HBV YMDD)변이적시제진행림상응용평개.방법:만성을형간염환자외주혈장표본217빈,분별채용형광표기Taqman탐침정량PCR법(FT-PCR)화형광표기잡교쌍탐침PCR융해곡선법(FH-PCR-MC)검측HBV DNA함량화YMDD급기변이;기중78빈HBVDNA양성표본채용기인형특이성다인물대소식PCR법진행기인분형(A-F),30빈표본용PCR산물극륭측서법검측HBV YMDD급기변이.결과:혈장표본HBV DNA양성솔(≥1.0×106copies/L)위75.6%(164/217).YMDD급기변이검출솔위67.7%(147/217),기중YMDD 44.9%(66/147),YIDD 225%(33/147),YVDD 17.7%(26/147),YIDD/YVDD혼합주10.9%(16/147),기타혼합주4.0%(6/147);결합HBV DNA함량,HBV YMDD급기변이적검출하한위HBV DNA=5.0×106copies/L,단재106copies/L시검출솔교저,부위36.4%,수착HBV DNA함량증고,검출솔현저증고(＞80%),차재107copies/L시즉유현저증고(x2=7.177,P＜0.01).재기인분형적78빈표본중,C기인형점89.8%,B화D기인형분별점8.9%화1.3%,YMDD급기변이총검출솔위100%,변이총검출솔위59.0%;1빈D기인형YMDD급기변이검측위YIDD/YVDD혼합변이;B,C량충기인형변이검출솔분별위71.4%화55.7%,단이자무통계학차이.이측서법적검측결과위상대표준,칙FH-PCR-MC법검측HBV YMDD급기변이적상대민감성、특이성화부합솔분별위96.3%(26/27),100%(3/3)화96.7%(29/30);대우HBV YMDD급기변이적류형,량충방법검측결과일치.결론:FH-PCR-MC법시일충쾌속、특이적HBVYMDD급기변이검측방법,구유교고적검출솔,차능구분YMDD급기변이적류형.