蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2011年
6期
1008-1013
,共6页
王成林%李昕琦%凌琳%徐家萍
王成林%李昕琦%凌琳%徐傢萍
왕성림%리흔기%릉림%서가평
抗菌肽%Thanatin%家蚕核型多角体病毒%多角体蛋白%原核表达%抗菌活性
抗菌肽%Thanatin%傢蠶覈型多角體病毒%多角體蛋白%原覈錶達%抗菌活性
항균태%Thanatin%가잠핵형다각체병독%다각체단백%원핵표체%항균활성
为利用大肠杆菌表达系统高效表达抗菌肽Thanatin并避免其抗菌活性对宿主菌的影响,将抗菌肽Thanatin基因与家蚕核型多角体病毒多角体蛋白Polyhedrin基因融合克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)-Thanatin-polyhedrin,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达.SDS-PAGE检测显示经诱导表达的菌体中有与融合蛋白理论值(35 kD)相符的目的条带.凝胶扫描分析目的融合蛋白以包涵体的形式表达,且诱导后6h融合蛋白的表达量最大,约占菌体总蛋白量的30％.纯化融合蛋白用盐酸羟胺切割后初步纯化获得具有抗菌活性的Thanatin蛋白.研究结果表明家蚕核型多角体病毒多角体蛋白能够作为抗菌肽Thanatin融合标签介导其高水平表达,有助于利用基因工程技术大规模生产抗菌肽Thanatin.
為利用大腸桿菌錶達繫統高效錶達抗菌肽Thanatin併避免其抗菌活性對宿主菌的影響,將抗菌肽Thanatin基因與傢蠶覈型多角體病毒多角體蛋白Polyhedrin基因融閤剋隆到錶達載體pET28a(+)中,構建重組錶達質粒pET28a(+)-Thanatin-polyhedrin,轉化大腸桿菌BL21(DE3)中錶達.SDS-PAGE檢測顯示經誘導錶達的菌體中有與融閤蛋白理論值(35 kD)相符的目的條帶.凝膠掃描分析目的融閤蛋白以包涵體的形式錶達,且誘導後6h融閤蛋白的錶達量最大,約佔菌體總蛋白量的30％.純化融閤蛋白用鹽痠羥胺切割後初步純化穫得具有抗菌活性的Thanatin蛋白.研究結果錶明傢蠶覈型多角體病毒多角體蛋白能夠作為抗菌肽Thanatin融閤標籤介導其高水平錶達,有助于利用基因工程技術大規模生產抗菌肽Thanatin.
위이용대장간균표체계통고효표체항균태Thanatin병피면기항균활성대숙주균적영향,장항균태Thanatin기인여가잠핵형다각체병독다각체단백Polyhedrin기인융합극륭도표체재체pET28a(+)중,구건중조표체질립pET28a(+)-Thanatin-polyhedrin,전화대장간균BL21(DE3)중표체.SDS-PAGE검측현시경유도표체적균체중유여융합단백이론치(35 kD)상부적목적조대.응효소묘분석목적융합단백이포함체적형식표체,차유도후6h융합단백적표체량최대,약점균체총단백량적30％.순화융합단백용염산간알절할후초보순화획득구유항균활성적Thanatin단백.연구결과표명가잠핵형다각체병독다각체단백능구작위항균태Thanatin융합표첨개도기고수평표체,유조우이용기인공정기술대규모생산항균태Thanatin.
