中国科学B辑
中國科學B輯
중국과학B집
SCIENCE IN CHINA (SERIES B)
2006年
4期
353-360
,共8页
张志锋%朱宏莉%唐一通%崔婷%耿婷婷%陈超%崔亚丽
張誌鋒%硃宏莉%唐一通%崔婷%耿婷婷%陳超%崔亞麗
장지봉%주굉리%당일통%최정%경정정%진초%최아려
链亲和素%磁性微粒%制备%应用
鏈親和素%磁性微粒%製備%應用
련친화소%자성미립%제비%응용
通过物理吸附和共价作用机制,制备两种链亲和素-磁性微粒,即链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒,并对其在不同缓冲液中的稳定性进行研究;采用酶抑制法测定两种链亲和素-磁性微粒对游离生物素的结合能力;分别以紫外吸收和固相核酸杂交方法,测定两种链亲和素-磁性微粒对生物素标记寡核苷酸探针的固定化容量及活性,并与Dynabeads(R)M-270 Streptavidin进行比较.结果表明:通过物理吸附作用制备的链亲和素-金磁微粒,适用于核酸杂交与检测常用的STE(Tris-NaCl-EDTA)缓冲系统,通过共价作用形成的链亲和素-氨基磁粒,适用于STE和磷酸盐(PBS)缓冲系统;1 mg链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒对游离生物素的最大结合容量分别为4950和5115 pmol;对生物素标记寡核苷酸探针(24 mer)的结合容量分别为2839和2978 pmol,测定结果均是Dynabeads(R)M-270 Streptavidin的6～7倍;与FITC-标记互补寡核苷酸的杂交结果表明,固定于链亲和素-磁性微粒表面的寡核苷酸探针保持了较好的生物学活性.
通過物理吸附和共價作用機製,製備兩種鏈親和素-磁性微粒,即鏈親和素-金磁微粒和鏈親和素-氨基磁粒,併對其在不同緩遲液中的穩定性進行研究;採用酶抑製法測定兩種鏈親和素-磁性微粒對遊離生物素的結閤能力;分彆以紫外吸收和固相覈痠雜交方法,測定兩種鏈親和素-磁性微粒對生物素標記寡覈苷痠探針的固定化容量及活性,併與Dynabeads(R)M-270 Streptavidin進行比較.結果錶明:通過物理吸附作用製備的鏈親和素-金磁微粒,適用于覈痠雜交與檢測常用的STE(Tris-NaCl-EDTA)緩遲繫統,通過共價作用形成的鏈親和素-氨基磁粒,適用于STE和燐痠鹽(PBS)緩遲繫統;1 mg鏈親和素-金磁微粒和鏈親和素-氨基磁粒對遊離生物素的最大結閤容量分彆為4950和5115 pmol;對生物素標記寡覈苷痠探針(24 mer)的結閤容量分彆為2839和2978 pmol,測定結果均是Dynabeads(R)M-270 Streptavidin的6～7倍;與FITC-標記互補寡覈苷痠的雜交結果錶明,固定于鏈親和素-磁性微粒錶麵的寡覈苷痠探針保持瞭較好的生物學活性.
통과물리흡부화공개작용궤제,제비량충련친화소-자성미립,즉련친화소-금자미립화련친화소-안기자립,병대기재불동완충액중적은정성진행연구;채용매억제법측정량충련친화소-자성미립대유리생물소적결합능력;분별이자외흡수화고상핵산잡교방법,측정량충련친화소-자성미립대생물소표기과핵감산탐침적고정화용량급활성,병여Dynabeads(R)M-270 Streptavidin진행비교.결과표명:통과물리흡부작용제비적련친화소-금자미립,괄용우핵산잡교여검측상용적STE(Tris-NaCl-EDTA)완충계통,통과공개작용형성적련친화소-안기자립,괄용우STE화린산염(PBS)완충계통;1 mg련친화소-금자미립화련친화소-안기자립대유리생물소적최대결합용량분별위4950화5115 pmol;대생물소표기과핵감산탐침(24 mer)적결합용량분별위2839화2978 pmol,측정결과균시Dynabeads(R)M-270 Streptavidin적6～7배;여FITC-표기호보과핵감산적잡교결과표명,고정우련친화소-자성미립표면적과핵감산탐침보지료교호적생물학활성.
