中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2009年
3期
13-17
,共5页
耿立英%张传生%杜立新%陈红菊%沈萍%付志新
耿立英%張傳生%杜立新%陳紅菊%瀋萍%付誌新
경립영%장전생%두립신%진홍국%침평%부지신
cvh基因%鸡原始生殖细胞%启动子%绿色荧光蛋白%胚盘细胞
cvh基因%鷄原始生殖細胞%啟動子%綠色熒光蛋白%胚盤細胞
cvh기인%계원시생식세포%계동자%록색형광단백%배반세포
探索建立一种用绿色荧光蛋白对鸡原始生殖细胞进行标记分离的方法.克隆并测序鸡原始生殖细胞特异表达基因cvh1.6kb启动子序列.序列分析表明它含有类似于TATAbox和CAATbox的元件,在其远端上游区域还有多个GC富含区.将cvh基因启动子亚克隆到绿色荧光蛋白表达栽pegfp-1的多克隆位点,成功构建表达栽体pcvh-egfp.重组质粒在脂质体Lipofectamine<'TM>2000介导下分别转染鸡X期胚盘细胞和鸡胚成纤维细胞,并于转染后12h在荧光显微镜下观察转染效果.实验结果显示:在胚盘细胞转染后12h可观测到绿色荧光表达,转染后24h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大;在鸡胚成纤维细胞未检测到gfp表达.实验结果说明,由cvh基因启动子控制下的gfp可在X期胚盘细胞特异表达,为利用流式分离技术PGCs标记分离、纯化研究奠定基础.
探索建立一種用綠色熒光蛋白對鷄原始生殖細胞進行標記分離的方法.剋隆併測序鷄原始生殖細胞特異錶達基因cvh1.6kb啟動子序列.序列分析錶明它含有類似于TATAbox和CAATbox的元件,在其遠耑上遊區域還有多箇GC富含區.將cvh基因啟動子亞剋隆到綠色熒光蛋白錶達栽pegfp-1的多剋隆位點,成功構建錶達栽體pcvh-egfp.重組質粒在脂質體Lipofectamine<'TM>2000介導下分彆轉染鷄X期胚盤細胞和鷄胚成纖維細胞,併于轉染後12h在熒光顯微鏡下觀察轉染效果.實驗結果顯示:在胚盤細胞轉染後12h可觀測到綠色熒光錶達,轉染後24h熒光細胞增多,細胞形態均呈圓形、體積較大;在鷄胚成纖維細胞未檢測到gfp錶達.實驗結果說明,由cvh基因啟動子控製下的gfp可在X期胚盤細胞特異錶達,為利用流式分離技術PGCs標記分離、純化研究奠定基礎.
탐색건립일충용록색형광단백대계원시생식세포진행표기분리적방법.극륭병측서계원시생식세포특이표체기인cvh1.6kb계동자서렬.서렬분석표명타함유유사우TATAbox화CAATbox적원건,재기원단상유구역환유다개GC부함구.장cvh기인계동자아극륭도록색형광단백표체재pegfp-1적다극륭위점,성공구건표체재체pcvh-egfp.중조질립재지질체Lipofectamine<'TM>2000개도하분별전염계X기배반세포화계배성섬유세포,병우전염후12h재형광현미경하관찰전염효과.실험결과현시:재배반세포전염후12h가관측도록색형광표체,전염후24h형광세포증다,세포형태균정원형、체적교대;재계배성섬유세포미검측도gfp표체.실험결과설명,유cvh기인계동자공제하적gfp가재X기배반세포특이표체,위이용류식분리기술PGCs표기분리、순화연구전정기출.
