河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
7期
92-96
,共5页
王青%胡建和%徐彦召%朱国坡%郑素玲
王青%鬍建和%徐彥召%硃國坡%鄭素玲
왕청%호건화%서언소%주국파%정소령
腺病毒载体%禽流感病毒%H5N1亚型%HA基因%载体构建
腺病毒載體%禽流感病毒%H5N1亞型%HA基因%載體構建
선병독재체%금류감병독%H5N1아형%HA기인%재체구건
采用PCR方法扩增出禽流感病毒HA基因,将其定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中构建pAdtrack-H5,之后将 pAdtrack-H5与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-H5,将pAdeasyd-H5经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞株,包装出含有HA基因的腺病毒pAd-H5.结果表明:含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-H5和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-H5经PCR、双酶切及核苷酸测序鉴定无误.包装成功的腺病毒pAd-H5经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达.
採用PCR方法擴增齣禽流感病毒HA基因,將其定嚮插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭質粒中構建pAdtrack-H5,之後將 pAdtrack-H5與腺病毒骨架質粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中進行同源重組,穫得腺病毒質粒pAdeasy-H5,將pAdeasyd-H5經PacⅠ線性化後轉染HEK293細胞株,包裝齣含有HA基因的腺病毒pAd-H5.結果錶明:含有目的基因的腺病毒穿梭質粒pAdtrack-H5和含有目的基因的腺病毒質粒pAdeasy-H5經PCR、雙酶切及覈苷痠測序鑒定無誤.包裝成功的腺病毒pAd-H5經綠色熒光蛋白和RT-PCR分析證實,目的基因在該細胞中成功錶達.
채용PCR방법확증출금류감병독HA기인,장기정향삽입pAdtrack-CMV선병독천사질립중구건pAdtrack-H5,지후장 pAdtrack-H5여선병독골가질립pAdeasy-1재기인공정균BJ5183중진행동원중조,획득선병독질립pAdeasy-H5,장pAdeasyd-H5경PacⅠ선성화후전염HEK293세포주,포장출함유HA기인적선병독pAd-H5.결과표명:함유목적기인적선병독천사질립pAdtrack-H5화함유목적기인적선병독질립pAdeasy-H5경PCR、쌍매절급핵감산측서감정무오.포장성공적선병독pAd-H5경록색형광단백화RT-PCR분석증실,목적기인재해세포중성공표체.
