现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2011年
5期
6-10
,共5页
王一%连小云%张玎%王晖%王岐山
王一%連小雲%張玎%王暉%王岐山
왕일%련소운%장정%왕휘%왕기산
细胞周期素D1%RNA干扰%人肝癌HepG2细胞%细胞周期%增殖
細胞週期素D1%RNA榦擾%人肝癌HepG2細胞%細胞週期%增殖
세포주기소D1%RNA간우%인간암HepG2세포%세포주기%증식
目的 利用PGE-1建立针对抑制cyclinD1功能的siRNA 真核表达载体以及对肝癌HepG2细胞增殖和周期的影响.方法 针对cyclinD1 mRNA序列设计合成4对寡核苷酸,退火后连接到PGE-1质粒中,PCR及测序鉴定.用脂质体将重组质粒转染到HepG2中,RT-PCR cyclinD1 mRNA的表达,G418筛选后用RT-PCR和Westernblot技术分别检测cyclinD1 mRNA和蛋白质水平;流式细胞仪测定细胞周期的变化;MTT法测定细胞的生长.结果 在设计的4条靶序列中有一序列重组成质粒后,可明显抑制cyclinD1的表达;目的 序列表达载体转染HepG2细胞后,可以明显减少G2-M期细胞的比例,当HepG2细胞稳定转染针对cyclinD1的干扰质粒后,mRNA和蛋白质的表达也明显降低;HepG2细胞cyclinD1表达降低后,其生长也受到明显抑制.结论 成功构建针对siRNA-cyclinD1真核质粒,在体外可成功抑制人肝癌HepG2细胞的增殖.
目的 利用PGE-1建立針對抑製cyclinD1功能的siRNA 真覈錶達載體以及對肝癌HepG2細胞增殖和週期的影響.方法 針對cyclinD1 mRNA序列設計閤成4對寡覈苷痠,退火後連接到PGE-1質粒中,PCR及測序鑒定.用脂質體將重組質粒轉染到HepG2中,RT-PCR cyclinD1 mRNA的錶達,G418篩選後用RT-PCR和Westernblot技術分彆檢測cyclinD1 mRNA和蛋白質水平;流式細胞儀測定細胞週期的變化;MTT法測定細胞的生長.結果 在設計的4條靶序列中有一序列重組成質粒後,可明顯抑製cyclinD1的錶達;目的 序列錶達載體轉染HepG2細胞後,可以明顯減少G2-M期細胞的比例,噹HepG2細胞穩定轉染針對cyclinD1的榦擾質粒後,mRNA和蛋白質的錶達也明顯降低;HepG2細胞cyclinD1錶達降低後,其生長也受到明顯抑製.結論 成功構建針對siRNA-cyclinD1真覈質粒,在體外可成功抑製人肝癌HepG2細胞的增殖.
목적 이용PGE-1건립침대억제cyclinD1공능적siRNA 진핵표체재체이급대간암HepG2세포증식화주기적영향.방법 침대cyclinD1 mRNA서렬설계합성4대과핵감산,퇴화후련접도PGE-1질립중,PCR급측서감정.용지질체장중조질립전염도HepG2중,RT-PCR cyclinD1 mRNA적표체,G418사선후용RT-PCR화Westernblot기술분별검측cyclinD1 mRNA화단백질수평;류식세포의측정세포주기적변화;MTT법측정세포적생장.결과 재설계적4조파서렬중유일서렬중조성질립후,가명현억제cyclinD1적표체;목적 서렬표체재체전염HepG2세포후,가이명현감소G2-M기세포적비례,당HepG2세포은정전염침대cyclinD1적간우질립후,mRNA화단백질적표체야명현강저;HepG2세포cyclinD1표체강저후,기생장야수도명현억제.결론 성공구건침대siRNA-cyclinD1진핵질립,재체외가성공억제인간암HepG2세포적증식.
