首都师范大学学报（自然科学版）
首都師範大學學報（自然科學版）
수도사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF CAPITAL NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
1期
39-44
,共6页
铁硫簇%SufC%融合表达%亲和层析%荧光共振能量转移
鐵硫簇%SufC%融閤錶達%親和層析%熒光共振能量轉移
철류족%SufC%융합표체%친화층석%형광공진능량전이
铁硫簇广泛存在于各种生物中,参与电子传递、底物结合和激活、基因表达和调控等重要功能.本文利用嗜热菌Thermus thermophilus HB8研究铁硫簇合成SUF系统中的三个关键蛋白SufB、SufC、SufD.以HB8的基因组为模板,通过PCR技术获得其su、sufC、sufD三个基因,随后构建了蛋白表达载体sufB-pET28a(+)、sufC-pET28a(+)、sufD-pGEX-6P-1,将其转入大肠杆菌Rosetta( DE3)进行蛋白表达,再利用亲和层析与凝胶过滤层析进行蛋白纯化.随后对SufB、SufC、SufD功能进行了初步研究,证明SufC对ATP具有亲和性,其亲和常数为15.2 μmol/L；证明SufB与SufC在体外具有相互作用,并得到了复合体SufBC,为进一步探讨其作用机制奠定了基础.
鐵硫簇廣汎存在于各種生物中,參與電子傳遞、底物結閤和激活、基因錶達和調控等重要功能.本文利用嗜熱菌Thermus thermophilus HB8研究鐵硫簇閤成SUF繫統中的三箇關鍵蛋白SufB、SufC、SufD.以HB8的基因組為模闆,通過PCR技術穫得其su、sufC、sufD三箇基因,隨後構建瞭蛋白錶達載體sufB-pET28a(+)、sufC-pET28a(+)、sufD-pGEX-6P-1,將其轉入大腸桿菌Rosetta( DE3)進行蛋白錶達,再利用親和層析與凝膠過濾層析進行蛋白純化.隨後對SufB、SufC、SufD功能進行瞭初步研究,證明SufC對ATP具有親和性,其親和常數為15.2 μmol/L；證明SufB與SufC在體外具有相互作用,併得到瞭複閤體SufBC,為進一步探討其作用機製奠定瞭基礎.
철류족엄범존재우각충생물중,삼여전자전체、저물결합화격활、기인표체화조공등중요공능.본문이용기열균Thermus thermophilus HB8연구철류족합성SUF계통중적삼개관건단백SufB、SufC、SufD.이HB8적기인조위모판,통과PCR기술획득기su、sufC、sufD삼개기인,수후구건료단백표체재체sufB-pET28a(+)、sufC-pET28a(+)、sufD-pGEX-6P-1,장기전입대장간균Rosetta( DE3)진행단백표체,재이용친화층석여응효과려층석진행단백순화.수후대SufB、SufC、SufD공능진행료초보연구,증명SufC대ATP구유친화성,기친화상수위15.2 μmol/L；증명SufB여SufC재체외구유상호작용,병득도료복합체SufBC,위진일보탐토기작용궤제전정료기출.
