中国全科医学
中國全科醫學
중국전과의학
CHINESE GENERAL PRACTICE
2005年
10期
792-795
,共4页
郐艳荣%汪朝晖%宋昉%杨艳玲%张晓%李座祥%李晓红%马旭
鄶豔榮%汪朝暉%宋昉%楊豔玲%張曉%李座祥%李曉紅%馬旭
회염영%왕조휘%송방%양염령%장효%리좌상%리효홍%마욱
脊肌萎缩症%运动神经元成活基因%变性高效液相色谱%基因诊断
脊肌萎縮癥%運動神經元成活基因%變性高效液相色譜%基因診斷
척기위축증%운동신경원성활기인%변성고효액상색보%기인진단
目的建立变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)快速诊断儿童型脊肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)的新方法.方法 (1) 用二重聚合酶链反应(PCR)扩增运动神经元成活基因(survival motor neuron gene,SMN)外显子7、8及周围部分内含子序列;(2)纯化PCR产物以除去其中的引物、dNTP及缓冲液中的盐粒子等成分;(3)采用多重引物延伸反应特异性检测能将SMN1基因与SMN2基因区分开的3个特异性位点;(4)将延伸反应的产物用DHPLC在完全变性的条件下分析.结果将建立的新方法与传统的PCR-酶切法进行盲法对比试验,检测了30例标本(包含20例SMA患儿和10例正常人群外周血基因组标本)以验证新方法的特异性和可靠性,其诊断结果与PCR-酶切法结果完全一致.结论多重引物延伸反应结合DHPLC分析技术是一种可用于临床SMA基因诊断、产前诊断及胚胎种植前遗传学诊断的高效、灵敏、可靠、快速、简便的新方法.
目的建立變性高效液相色譜(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)快速診斷兒童型脊肌萎縮癥(spinal muscular atrophy,SMA)的新方法.方法 (1) 用二重聚閤酶鏈反應(PCR)擴增運動神經元成活基因(survival motor neuron gene,SMN)外顯子7、8及週圍部分內含子序列;(2)純化PCR產物以除去其中的引物、dNTP及緩遲液中的鹽粒子等成分;(3)採用多重引物延伸反應特異性檢測能將SMN1基因與SMN2基因區分開的3箇特異性位點;(4)將延伸反應的產物用DHPLC在完全變性的條件下分析.結果將建立的新方法與傳統的PCR-酶切法進行盲法對比試驗,檢測瞭30例標本(包含20例SMA患兒和10例正常人群外週血基因組標本)以驗證新方法的特異性和可靠性,其診斷結果與PCR-酶切法結果完全一緻.結論多重引物延伸反應結閤DHPLC分析技術是一種可用于臨床SMA基因診斷、產前診斷及胚胎種植前遺傳學診斷的高效、靈敏、可靠、快速、簡便的新方法.
목적건립변성고효액상색보(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)쾌속진단인동형척기위축증(spinal muscular atrophy,SMA)적신방법.방법 (1) 용이중취합매련반응(PCR)확증운동신경원성활기인(survival motor neuron gene,SMN)외현자7、8급주위부분내함자서렬;(2)순화PCR산물이제거기중적인물、dNTP급완충액중적염입자등성분;(3)채용다중인물연신반응특이성검측능장SMN1기인여SMN2기인구분개적3개특이성위점;(4)장연신반응적산물용DHPLC재완전변성적조건하분석.결과장건립적신방법여전통적PCR-매절법진행맹법대비시험,검측료30례표본(포함20례SMA환인화10례정상인군외주혈기인조표본)이험증신방법적특이성화가고성,기진단결과여PCR-매절법결과완전일치.결론다중인물연신반응결합DHPLC분석기술시일충가용우림상SMA기인진단、산전진단급배태충식전유전학진단적고효、령민、가고、쾌속、간편적신방법.
