微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
3期
452-455
,共4页
酯酶%P. putida NH33%克隆%序列
酯酶%P. putida NH33%剋隆%序列
지매%P. putida NH33%극륭%서렬
从土样分离到一株产生具有立体选择性酯水解酶的恶臭假单孢菌(Pseudomonas putida NH33).构建P.putida NH33的基因组文库,并在E.coli中进行酯酶活性筛选,得到一个含有4.7kb插入片段的阳性克隆.对这个克隆的DNA片段进行序列分析,表明它含有一个1142个碱基的开放阅读框,为编码381个氨基酸的酯酶.推测的酯酶氨基酸序列与其它丝氨酸酯水解酶具有共同的保守基序GXSXG.把该蛋白在E.coli BL21(DE3)中进行表达,并用金属亲和层析纯化至单一条带.利用纯化的酶水解2-芳基丙酸乙酯制备2-芳基丙酸的S型异构体,产物的光学纯度eep＞99%,说明此酶可8用于手性药物的合成.该酯酶是一个新酶,其基因序列已递交GenBank,登记号为AY896293.
從土樣分離到一株產生具有立體選擇性酯水解酶的噁臭假單孢菌(Pseudomonas putida NH33).構建P.putida NH33的基因組文庫,併在E.coli中進行酯酶活性篩選,得到一箇含有4.7kb插入片段的暘性剋隆.對這箇剋隆的DNA片段進行序列分析,錶明它含有一箇1142箇堿基的開放閱讀框,為編碼381箇氨基痠的酯酶.推測的酯酶氨基痠序列與其它絲氨痠酯水解酶具有共同的保守基序GXSXG.把該蛋白在E.coli BL21(DE3)中進行錶達,併用金屬親和層析純化至單一條帶.利用純化的酶水解2-芳基丙痠乙酯製備2-芳基丙痠的S型異構體,產物的光學純度eep＞99%,說明此酶可8用于手性藥物的閤成.該酯酶是一箇新酶,其基因序列已遞交GenBank,登記號為AY896293.
종토양분리도일주산생구유입체선택성지수해매적악취가단포균(Pseudomonas putida NH33).구건P.putida NH33적기인조문고,병재E.coli중진행지매활성사선,득도일개함유4.7kb삽입편단적양성극륭.대저개극륭적DNA편단진행서렬분석,표명타함유일개1142개감기적개방열독광,위편마381개안기산적지매.추측적지매안기산서렬여기타사안산지수해매구유공동적보수기서GXSXG.파해단백재E.coli BL21(DE3)중진행표체,병용금속친화층석순화지단일조대.이용순화적매수해2-방기병산을지제비2-방기병산적S형이구체,산물적광학순도eep＞99%,설명차매가8용우수성약물적합성.해지매시일개신매,기기인서렬이체교GenBank,등기호위AY896293.
