江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2012年
4期
307-311
,共5页
刘晓梅%庞蓉蓉%赵聃%李妍%单锴%王迎伟
劉曉梅%龐蓉蓉%趙聃%李妍%單鍇%王迎偉
류효매%방용용%조담%리연%단개%왕영위
细胞因子信号抑制蛋白-3基因%3′端非翻译区%微小RNA%荧光素酶报告载体
細胞因子信號抑製蛋白-3基因%3′耑非翻譯區%微小RNA%熒光素酶報告載體
세포인자신호억제단백-3기인%3′단비번역구%미소RNA%형광소매보고재체
目的:研究细胞因子信号抑制蛋白-3(suppressors of cytokine signaling-3,SOCS3)基因3′端非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)微小RNA(microRNA,miRNA)的调控作用,构建重组SOCS3基因3′-UTR荧光素酶报告载体,并通过荧光素酶活性测定,初步分析可能调控SOCS3基因表达的miRNAs.方法:采用PCR方法从原代培养的小鼠星形胶质细胞基因组DNA中扩增SOCS3基因3′-UTR序列,插入荧光素酶报告载体pGL3-Promoter,获得重组载体pGL3-Promoter/SOCS3;通过Target Scan5.2、RNAhybrid 和FINDTAR3软件预测可能与SOCS3基因3′-UTR结合的miRNAs;将pGL3-Promoter/SOCS3重组质粒和miRNAs共转染HEK 293T细胞,测定SOCS3 3′-UTR荧光素酶的活性.结果:酶切及核酸测序证实,成功构建了SOCS3基因3′-UTR序列的荧光素酶报告重组子;miRNA靶位点预测显示,SOCS3基因可能是miR-203、miR-291a-5p、miR-9、miR-140和miR-130b的作用靶标;与对照组相比,miR-203、miR-291a-5p、miR-140能使SOCS3 3′-UTR荧光素酶的活性显著降低.结论:成功构建了SOCS3 基因3′-UTR荧光素酶报告载体,且miR-203、miR-291a-5p、miR-140可显著降低其荧光素酶的活性.
目的:研究細胞因子信號抑製蛋白-3(suppressors of cytokine signaling-3,SOCS3)基因3′耑非翻譯區(3′-untranslated region,3′-UTR)微小RNA(microRNA,miRNA)的調控作用,構建重組SOCS3基因3′-UTR熒光素酶報告載體,併通過熒光素酶活性測定,初步分析可能調控SOCS3基因錶達的miRNAs.方法:採用PCR方法從原代培養的小鼠星形膠質細胞基因組DNA中擴增SOCS3基因3′-UTR序列,插入熒光素酶報告載體pGL3-Promoter,穫得重組載體pGL3-Promoter/SOCS3;通過Target Scan5.2、RNAhybrid 和FINDTAR3軟件預測可能與SOCS3基因3′-UTR結閤的miRNAs;將pGL3-Promoter/SOCS3重組質粒和miRNAs共轉染HEK 293T細胞,測定SOCS3 3′-UTR熒光素酶的活性.結果:酶切及覈痠測序證實,成功構建瞭SOCS3基因3′-UTR序列的熒光素酶報告重組子;miRNA靶位點預測顯示,SOCS3基因可能是miR-203、miR-291a-5p、miR-9、miR-140和miR-130b的作用靶標;與對照組相比,miR-203、miR-291a-5p、miR-140能使SOCS3 3′-UTR熒光素酶的活性顯著降低.結論:成功構建瞭SOCS3 基因3′-UTR熒光素酶報告載體,且miR-203、miR-291a-5p、miR-140可顯著降低其熒光素酶的活性.
목적:연구세포인자신호억제단백-3(suppressors of cytokine signaling-3,SOCS3)기인3′단비번역구(3′-untranslated region,3′-UTR)미소RNA(microRNA,miRNA)적조공작용,구건중조SOCS3기인3′-UTR형광소매보고재체,병통과형광소매활성측정,초보분석가능조공SOCS3기인표체적miRNAs.방법:채용PCR방법종원대배양적소서성형효질세포기인조DNA중확증SOCS3기인3′-UTR서렬,삽입형광소매보고재체pGL3-Promoter,획득중조재체pGL3-Promoter/SOCS3;통과Target Scan5.2、RNAhybrid 화FINDTAR3연건예측가능여SOCS3기인3′-UTR결합적miRNAs;장pGL3-Promoter/SOCS3중조질립화miRNAs공전염HEK 293T세포,측정SOCS3 3′-UTR형광소매적활성.결과:매절급핵산측서증실,성공구건료SOCS3기인3′-UTR서렬적형광소매보고중조자;miRNA파위점예측현시,SOCS3기인가능시miR-203、miR-291a-5p、miR-9、miR-140화miR-130b적작용파표;여대조조상비,miR-203、miR-291a-5p、miR-140능사SOCS3 3′-UTR형광소매적활성현저강저.결론:성공구건료SOCS3 기인3′-UTR형광소매보고재체,차miR-203、miR-291a-5p、miR-140가현저강저기형광소매적활성.
